Multi-residue Automated Turbulent Flow Online LC-MS/MS Method for the Determination of Antibiotics in Milk

Význam tématu

Kontrola reziduí antibiotik v mléce je zásadní pro ochranu spotřebitele a splnění legislativních limitů Evropské unie. Více tříd antibiotik v jednom testu výrazně zefektivňuje monitorovací procesy a snižuje náklady laboratoří.

Cíle a přehled studie / článku

Studie popisuje validovaný multi-reziduální LC-MS/MS postup pro kvantitativní stanovení 36 antibiotik z 7 skupin (aminoglykosidy, sulfonamidy, makrolidy, chinolony, tetracykliny, linkosamidy, trimethoprim) v mléce. Metoda splňuje požadavky EU rozhodnutí 2002/657/EC.

Použitá metodika a instrumentace

Extrakce:

• Vzorek mléka (500 mg) je promíchán s 450 µl acetonitrilu a 50 µl interního standardu (sulfaphenazole).
• Vortex 5 min, odstředění 12 000 rpm/5 min, filtrace 0,45 µm.

Online čištění:

• Turbulent Flow Cyclone P kolona (50×0,5 mm) pro odstranění makromolekul.
• Přenos analytů na analytickou kolonu BetaSil phenyl-hexyl (50×2,1 mm, 3 µm) v jednorozběhu.

Chromatografie a detekce:

• Transcend TLX-1 systém s Aria softwarem; mobilní fáze: voda/formická a HFBA, acetonitril/methanol, acetone/acetonitril/isopropanol.
• TSQ Quantum Access Max, pozitivní ESI, MRM režim, optimovaná tranzice a kolizní energie.

Hlavní výsledky a diskuse

Lineární oblast metody 0–500 µg/kg, r>0,99 pro všechny analyty. Limity detekce (LOD) a kvantifikace (LOQ) pod MRL. Mezní hodnoty rozhodnutí (CCα) a schopnosti detekce (CCβ) potvrzeny podle ISO 11843. Opakovatelnost (RSD) 4–28 %, zotavení 78–120  %.

Přínosy a praktické využití metody

Díky online turbulentnímu toku se výrazně zkracuje příprava vzorku a zvyšuje propustnost analýz. Jedna extrakce pokrývá široké spektrum antibiotik, což přináší úsporu času a provozních nákladů. Metoda je vhodná pro rutinní QA/QC a regulační monitoring.

Budoucí trendy a možnosti využití

Dalším směrem je rozšíření spektra analyzovaných pesticidů a farmak v různých potravinových matricích, integrace plně automatizovaných přístrojových linek a propojení s pokročilou datovou analýzou (strojové učení) pro rychlejší interpretaci výsledků.

Závěr

Popisovaný postup představuje rychlý, spolehlivý a legislativě vyhovující nástroj pro kvantitativní stanovení reziduí antibiotik v mléce. Díky kombinaci turbulentní chromatografie a LC-MS/MS lze významně zvýšit efektivitu a propustnost laboratoře.

Reference

• Gaugain-Juhel M., Delepine B., Gautier S., Fourmond M.P., Gaudin V., Hurtaud-Pessel D., Verdon E., Sanders P. Validation of a liquid chromatography-tandem mass spectrometry screening method to monitor 58 antibiotics in milk: a qualitative approach. Food Addit. Contam. 2009, 26, 1459–1471.
• Stolker A.A.M., Ruud J.B.P., Zuiderent R., DiBussolo J.M., Martins C.P.B. Fully automated screening of veterinary drugs in milk by turbulent flow chromatography and tandem mass spectrometry. Anal. Bioanal. Chem. 2010, 397, 2841–2849.
• EU Commission Decision 2002/657/EC. Official Journal of the European Communities 2002, L221/8.
• ISO 11843: Capability of detection. 1997.