Evaluation of Prelude SPLC and TSQ Endura Mass Spectrometer in Research Analysis of Testosterone in Human Serum

Význam tématu

Analýza testosteronu v lidské séru je klíčová pro klinický výzkum hormonálních stavů, diagnostiku endokrinních onemocnění a monitorování terapeutických postupů. Robustní a citlivé metody měření usnadňují stanovení nízkých koncentrací v biologických matricích, minimalizují maticové interference a zvyšují laboratorní produktivitu.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo porovnat dva kvantitativní přístupy pro stanovení testosteronu v lidské séru pomocí systému Thermo Scientific Prelude SPLC spojeného s triplekvadrupólovým hmotnostním spektrometrem TSQ Endura. Metody zahrnovaly:

• Online cleanup s využitím TurboFlow technologie pro automatickou extrakci a chromatografickou separaci.
• Offline liquid–liquid extrakci (LLE) s methyl-terc.butyléterem následovanou koncentrací vzorku.

Použitá metodika

Obě metody sdílely shodná hmotnostně spektrometrická nastavení (HESI zdroj, režim SRM) s přechody m/z 289,2 → 97,2 a 109,2 pro testosteron a m/z 293,4 → 100,2 pro vnitřní standard. Rozdíly spočívaly v přípravě vzorku a chromatografických podmínkách:

• Online metoda: 200 µl séra zředěno 1:1 (v/v) vodou/methanolem s interním standardem, injekce 100 µl na TurboFlow kolonu Cyclone-P (50×0,5 mm), poté analytická kolona Accucore aQ (50×3,0 mm).
• Offline metoda: LLE se 70 µl methyl-terc.butyléteru, dvakrát koncentrováno, injekce 50 µl na Accucore aQ (50×3,0 mm).

Použitá instrumentace

• Thermo Scientific Prelude SPLC s dual-channel možností multiplexace.
• TurboFlow extrakční kolona Thermo Scientific Cyclone-P.
• Analytická kolona Thermo Scientific Accucore aQ (2,6 µm, 50×3,0 mm).
• Hmotnostní spektrometr Thermo Scientific TSQ Endura s HESI zdrojem.
• Solventy Fisher Chemical pro mobilní fáze.

Hlavní výsledky a diskuse

Obě metody splnily požadavky na citlivost i přesnost:

• Limit kvantifikace (LOQ): 20 pg/mL (online), 10 pg/mL (offline).
• Kalibrační rozsah: 20–10 000 pg/mL (online), 10–10 000 pg/mL (offline).
• RSD intra–meziassay: vždy pod 15 %.
• Minimální maticové efekty a zanedbatelný carry-over pod 20 % signálu LLOQ.
• Doba analýzy: 4 minuty (online), 6,5 minuty (offline).
• Diluce donorových vzorků ukázala obnovu 96–102 % pro 2×–16× ředění (online metoda).

Multiplexace na dvoukanálovém Prelude SPLC umožňuje zdvojnásobit průtok vzorků bez ztráty analytické kvality.

Přínosy a praktické využití metody

• Zrychlená a automatizovaná příprava vzorku (online TurboFlow) s minimální manuální manipulací.
• Vysoká citlivost a spolehlivost pro klinický výzkum i farmaceutická QA/QC.
• Flexibilita volby mezi online a offline přípravou podle potřeb laboratoře.
• Možnost multiplexace zvyšuje laboratorní kapacitu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozvoj duálního SPLC a rozšíření TurboFlow technologie může vést k dalšímu zrychlení analýz hormonů a farmakokinetických studií. Možné směry:

• Integrace dalších derivatizačních kroků on-line pro rozšíření aplikačního spektra.
• Využití v multi-analyzních protokolech pro komplexní endokrinní profily.
• Rozšíření na jiné biologické matice (moč, slzy) s minimální úpravou metody.

Závěr

Systém Prelude SPLC spojený s TSQ Endura poskytuje robustní, citlivou a vysoce průkaznou platformu pro stanovení testosteronu v lidské séru. Obě validované metody (online TurboFlow a offline LLE) dosahují nízkých LOQ, širokého kalibračního rozsahu, rychlých analýz a nízké maticové interference. Dual-channel multiplexace dále zvyšuje laboratorní produktivitu.

Reference

Žádné uvedené publikace.