Sample Preparation Method for Determination of Voriconazole in Plasma Using ISOLUTE® SLE+

Význam tématu

Voriconazol je klíčový triazolový antimykotikum využívané v léčbě závažných plísňových infekcí, včetně aspergilózy a kandidémie. Díky úzkému terapeutickému oknu a možným nežádoucím účinkům (QT prodloužení, toxická epidermální nekrolýza) je přesné stanovení jeho hladiny v plazmě nezbytné pro monitorování terapie.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem tohoto přípravku je představit jednoduchou a efektivní metodu extrakce vzorků plazmy pro stanovení voriconazolu pomocí desek ISOLUTE SLE+ vhodnou jak pro UV spektrofotometrii, tak pro LC-MS/MS analýzu. Metoda nabízí alternativu k tradičním kapalně-kapalinným extrakcím s vysokou výtěžností a minimalizací interferencí.

Použitá metodika a instrumentace

• Příprava vzorku: 200 µl plazmy s interním standardem DDPC (0,5 µg/ml), doplnění 200 µl vody, vortex 30 s.
• Extrakcese na ISOLUTE SLE+ 400 µl kolonce: naložení 400 µl vzorku, absorpce 5 min.
• Eluce: 2×900 µl hexan:diethylether (1:1 v/v), gravitací nebo pod nízkým tlakem.
• Evaporace dusíkem, rekonstituce ve vodě:methanolu (1:1 v/v, 2 ml), případně koncentrování pro UV detekci.
• LC-MS/MS analýza: UHPLC Nexera LC-30AD, kolona ACQUITY UPLC BEH C18 (2,1×50 mm, 1,7 µm), mobilní fáze A 0,1 % kyseliny mravenčí ve vodě, B acetonitril, gradient 95→5 % A v 0–3 min, 5 % A v 3–4 min, návrat do 95 % A v 4,1–6,5 min, flow 0,4 ml/min, teplota 40 °C.
• MS/MS: Shimadzu LCMS-8060, ESI+; SRM transtiony voriconazolu 350,15→127,10 (quant), 350,15→281,10 (qual), DDPC 313,30→284,15 (quant), 350,15→281,10 (qual).

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala lineární rozsah 0,1–250 ng/ml s koeficientem r²=0,999. Pro TDM požadované koncentrační rozmezí 0,1–10 µg/ml lze využít UV detekci po koncentrování. Desky ISOLUTE SLE+ efektivně odstraňují fosfolipidy, čímž minimalizují matriceové efekty. Získaná výtěžnost přes 90 % při všech testovaných koncentracích a nízké hodnoty matričních faktorů potvrzují robustnost metody.

Přínosy a praktické využití metody

• Vyšší výtěžnost a reproducibilita oproti klasické LLE.
• Žádné emulze, jednoduchá manipulace a možnost automatizace.
• Vhodné pro široké spektrum antimikrobiálních látek.
• Kompatibilní s UV i s vysoce selektivní LC-MS/MS detekcí.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření SLE technologií pro vysokopropustné platformy, integraci s automatizovanými robotickými systémy a využití ve spojení s vysoce rozlišujícími hmotnostními spektrometry. Dalšími směry jsou miniaturizace protokolů a rozšíření na nové chemické třídy léčiv.

Závěr

Popsaná metoda extrakce na ISOLUTE SLE+ poskytuje rychlou, vysoce výtěžnou a spolehlivou přípravu vzorků plazmy pro stanovení voriconazolu. Vysoká selektivita a citlivost spolu s robustními výsledky ji činí ideální volbou pro terapeutické monitorování i farmaceutický výzkum.