Improvements in the Chromatographic Performance of Antiviral Compounds Analyzed with MaxPeak HPS Technology

Význam tématu

Analytické sledování antivirotik je klíčové pro zajištění kvality a bezpečnosti léčivých přípravků, zejména v kontextu nově se vyvíjejících terapií proti závažným onemocněním jako COVID-19. Kvalitní chromatografická metoda umožňuje detekci nízkoúrovňových nečistot a degradačních produktů dříve, než dosáhnou kritických koncentrací, a tím podporuje důvěryhodnost a robustnost rutinních QC protokolů.

Cíle a přehled studie

Cílem předložené práce bylo porovnat chromatografickou výkonnost reverzněfázové HPLC kolony XBridge Premier BEH C18 vybavené technologií MaxPeak HPS s konvenční ocelovou kolonu XBridge BEH C18 XP. Testován byl panel dvanácti antivirotik reprezentujících různé chemické třídy a rozpustnosti. Hodnotily se retenční charakteristiky, tvar piků, výška odezvy a poměr signálu k šumu.

Použitá instrumentace

Ultravysoce výkonný LC systém ACQUITY Arc vybavený Quaternary Solvent Manager (rQSM), Sample Manager (rFTN), Column Manager (rCM) a softwarem Empower 3.
Detekce probíhala pomocí PDA detektoru ACQUITY nastavěného na 245 nm.
Kolony:

• XBridge Premier BEH C18, 2,5 µm, 4,6×150 mm (P/N 186009849)
• XBridge BEH C18 XP, 2,5 µm, 4,6×150 mm (P/N 186006711)

Podmínky:

• Teplota kolony 50 °C, teplota vzorku 20 °C
• Objem injekce 1 µL, průtok 1,5 mL/min
• Mobilní fáze A: 10 mM amon. formiát pH 4,0; B: acetonitril
• Gradient: 2 % B po 4 min, lineární nárůst na 95 % B do 15 min, 1 min hold, návrat na 2 % B.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila separaci všech 12 antivirotik. Slabě polární sloučeniny (methanolově rozpustné) se retendovaly nad 9 min, vodou rozpustné pod 9 min. XBridge Premier kolona vykázala:

• Vyšší výšky chromatografických piků pro všechny sloučeniny
• Zvýšený poměr signál/šum (S/N)
• Lepší symetrii a snížené přišpičatění piků (nižší w5σ)

Zmenšení šířky píků o více než 20 % potvrzuje omezení nekovalentních interakcí analyty–kov. Eliminace potřeby iontově párovacích aditiv a pasivace zjednodušuje rutinní provoz.

Přínosy a praktické využití metody

Nová povrchová technologie MaxPeak HPS významně zlepšuje citlivost a reprodukovatelnost analýzy antivirotik bez použití agresivních aditiv. Metoda je vhodná pro kontrolu kvality a stability léčiv v prostředích pharmaceutických laboratoří a QC oddělení.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření hybridních povrchových technologií do dalších oblastí, zejména pro:

• Analýzy kovy-labilních biomolekul v LC-MS
• Metodiky rychlé farmakokinetiky a bioanalýzy
• Miniaturizované kapilární a mikro-LC systémy
• Průmyslové aplikace v potravinářství a environmentálním monitoringu

Závěr

Studie prokázala, že HPS povrchová úprava XBridge Premier kolony zvyšuje výkonnost při analýze antivirotik oproti konvenční ocelové koloně. Výsledky potvrzují význam omezení interakcí analytu s kovovými povrchy pro zvýšení citlivosti, přesnosti a robustnosti metod.

Reference

• NIH COVID Treatment Guidelines. Antiviral Therapies. 2021.
• DeLano M. et al. Analytical Chemistry, 93(14), 2021.
• Plumb R., Wilson I. The Column, 17(8), 2021.
• Kausar S. et al. Int. J. Immunopathol. Pharmacol., 35:1–12, 2021.
• ChemSpider 2D Structure Database, www.chemspider.com, přístup 20. 9. 2021.
• Arsenault J.C., McDonald P. Beginners Guide to Liquid Chromatography. Waters Primer 715001531, 2007.