LC-MS/MS Method for the Determination of Steroids from Urine Using SOLA and Core Enhanced Technology Accucore HPLC Column

Význam tématu

Steroidní hormony v moči jsou klíčovými biomarkery pro klinickou diagnostiku, farmakokinetiku a dopingové kontroly. Rychlá, citlivá a reprodukovatelná analýza těchto sloučenin je zásadní pro vysoce propustné laboratoře, kde nízké spotřeby vzorku a rozpouštědel snižují náklady a dobu analýzy.

Cíle a přehled studie/článku

Cílem bylo demonstrovat použití Thermo Scientific SOLA SPE 96 well destiček pro extrakci čtyř steroidů (hydrokortizon, kortizon, kortikosteron, 11-α hydroxyprogesteron) z moči a jejich následnou rychlou separaci a kvantifikaci pomocí LC-MS/MS na Accucore RP-MS kolóně a TSQ Vantage hmotnostním spektrometru.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika extrakce:

• Matice: lidská moč
• SOLA 96 well SPE destička – kondicionace 1 mL methanolu a 1 mL vody
• Aplikace vzorku: 1 mL moči obsahující vnitřní standardy
• Praní: 200 µL 20:80 (v/v) methanol/voda
• Eluce: 2 × 200 µL methanolu
• Evaporace pod dusíkem a rekonstrukce ve 200 µL vody

Instrumentace:

• LC: Thermo Scientific Accela s kolónou Accucore RP-MS (2.6 µm, 100 × 2.1 mm), mobilní fáze A (voda + 0,1 % FA), B (acetonitril + 0,1 % FA), gradient 25–75 % B za 4 min, průtok 0,6 mL/min, teplota 25 °C, injekce 2,5 µL
• MS: Thermo Scientific TSQ Vantage, HESI, pozitivní režim, spray voltage 3000 V, vaporizer 300 °C, sheath gas 60, aux gas 30, capillary 300 °C, collision pressure 1,5 mTorr, Q1/Q3 šířka 0,7 FWHM
• Software: Thermo Scientific LC QUAN pro zpracování dat

Hlavní výsledky a diskuse

Separace všech čtyř steroidů proběhla za méně než 3 minuty s výbornou špičkovou účinností. Linearity v dynamickém rozsahu 1–1000 ng/mL byla pro hydrokortizon (r2 = 0,9937), kortizon (0,9981), kortikosteron (0,9998) a 11-α hydroxyprogesteron (0,9992). Endogenní koncentrace v moči byly: hydrokortizon 17,3 ng/mL (RSD 11,1 %), kortizon 55,6 ng/mL (RSD 7,4 %). QC vzorky vykázaly přesnost a precizitu pod 3 % RSD. Úspěšné recovery testy (131 % pro kortikosteron, 131 % pro 11-α hydroxyprogesteron) a nulový carryover potvrzují robustnost metody.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí vysokou čistotu extraktů, nízkou spotřebu rozpouštědel, zkrácené časy analýzy a vysokou citlivost. Je ideální pro klinické laboratoře, farmakologický výzkum a dopingovou kontrolu s požadavkem na vysokou propustnost a reprodukovatelnost.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozšíření může zahrnovat multiplexní analýzy většího počtu steroidů či jejich metabolitů, plnou automatizaci pracovního postupu a integraci do vysoce propustných diagnostických platforem.

Závěr

Kombinace SOLA SPE well destiček a Accucore RP-MS kolóny s TSQ Vantage MS umožnila rychlou, citlivou a reprodukovatelnou analýzu steroidů v moči s výbornými analytickými parametry, což potvrzuje široké uplatnění metody v praxi.

Reference

• MacRitchie E.; Phipps K. Thermo Scientific Application Note ANCCSSOLASTDS, 2011.