Transfer of a Heart Disease Treatment Analysis from an Agilent 1100 System to an UltiMate 3000 HPLC System

Význam tématu

Transfer metod HPLC mezi různými systémy je v praxi běžnou, ale často náročnou úlohou. Přesné opakování chromatografických podmínek, zejména u gradientních separací, vyžaduje optimalizaci parametrů tekutinových cest instrumentu. Úspěšné převedení metody z Agilent 1100 na UltiMate 3000 umožňuje laboratořím zachovat kontinuitu analýz, plnit požadavky na validaci a reagovat na postupné vyřazování zastaralých přístrojů z výroby.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo ukázat postupné kroky a úpravy potřebné k plynulému přenosu gradientní HPLC metody pro analýzu léčiv proti srdečním chorobám z Agilent 1100 systému na Thermo Scientific Dionex UltiMate 3000. Vzorkem byla směs diuretik a inhibitorů ACE s osmi analytickými špičkami, včetně známé nečistoty.

Použitá metodika a instrumentace

Agilent 1100:

• Degasser G1322A, QuatPump G1311A, WPALS G1367A, DAD G1315A
• Kolona Accucore XL C18 4.6×150 mm, 4 µm
• Gradient 90→20→20→90 % A/B při 1.2 mL/min, teplota 50 °C, detekce UV 214 nm

UltiMate 3000 SD:

• Degasser SRD-3400, pumpa LPG-3400SD, WPS-3000TSL, TCC-3000SD, DAD-3000
• Výchozí Gradient Delay Volume (GDV) menší než u Agilent a modulární SpinFlow™ mixery

Pro korekci časového posunu byla v UltiMate 3000 instalována dvěmístná SpinFlow™ směšovací jednotka o celkovém objemu 800 µL (P/N 6040.5750).

Hlavní výsledky a diskuse

Přímé srovnání chromatogramů ukázalo artefakty na začátku a na konci gradientu u obou systémů, jejichž průběh byl velmi podobný. Systém UltiMate 3000 vykázal o něco dřívější eluční časy (max. odchylka 0,19 min) a výrazně ostřejší špičky díky nižšímu GDV a efektivnějšímu předehřívání mobilní fáze. Nasazení 800 µL mixeru odstranilo rozdíl v retenčních časech pro většinu analyzovaných sloučenin na hodnoty do 0,06 min. Zlepšení parametrů špiček (výška +3–98 %, šířka redukce 10–19 %, rozlišení +11–36 %) potvrdilo vyšší účinnost nové platformy.

Přínosy a praktické využití metody

Implementace UltiMate 3000 přinesla:

• Zachování validovaných retenčních časů
• Vyšší citlivost a lepší rozlišení
• Rychlejší zahřátí mobilní fáze a kratší doby analýzy
• Modulární přístup k optimalizaci GDV v závislosti na požadavcích metody

Budoucí trendy a možnosti využití

Dalšími směry jsou:

• Automatizace výpočtu optimálního GDV pomocí softwarových nástrojů
• Rozšíření na ultra-UHPLC formáty s nižšími objemy GDV
• Integrace pokročilých diagnostických modulů pro sledování hydrodynamických parametrů v reálném čase
• Využití machine learningu pro predikci chování gradientních systémů při přenosu metod

Závěr

Studie prokázala, že přenos gradientní HPLC metody z Agilent 1100 na UltiMate 3000 je jednoduchý a efektivní. Klíčovým krokem je optimalizace gradient delay volume instalací vhodného mixeru, což zajistí zachování retenčních časů a současně zvýšení účinnosti separace a citlivosti detekce.

Reference

1. Steiner F. UHPLC: Analyzing Complex Samples Faster — Practical Considerations for Maximizing Performance and Productivity in UHPLC. GIT Laboratory Journal, 2014.
2. Bailey B., Gamache P., Acworth I. Guidelines for Method Transfer and Optimization — From Earlier Model Corona Detectors to Corona Veo Detectors. Thermo Fisher Scientific Technical Note TN71290, 2014.
3. Krull I., Swartz M. Analytical Method Transfer. LCGC, 24(11), 2006.
4. Thermo Scientific. Reliable Solvent Mixing in UHPLC. Technical Note 108, 2011.