Method transfer of a USP derived acetaminophen assay from an Agilent 1260 Infinity system to an UltiMate 3000 SD system and a Vanquish Flex UHPLC system

Význam tématu

Správný přenos analytických HPLC metod z jednoho přístroje na druhý je zásadní pro udržení konzistence výsledků a splnění regulačních požadavků. V farmaceutické praxi umožňuje provádět kontrolu kvality a uvolňování šarží bez časově náročné revalidace.

Cíle a přehled studie

Studie demonstruje postup přenosu USP metody stanovení acetaminofenu a jeho nečistot z Agilent 1260 Infinity na systémy Thermo Scientific UltiMate 3000 SD a Vanquish Flex. Hlavním cílem je ověřit shodu retenčních časů, rozlišení, tvaru špiček a citlivosti detekce při minimálních úpravách originální metody.

Použitá metodika a instrumentace

• Kolona Hypersil GOLD C8 4,6×100 mm, 3 µm, teplota 35 °C s možností eluent pre-heateru.
• Mobile phase A: voda s 1,7 g/l KH2PO4 a 1,8 g/l Na2HPO4; mobile phase B: methanol; gradient dle USP.
• Průtok 1 ml/min, injekce 1 µl, UV detekce 230 nm.
• Agilent 1260 Infinity Quaternary Pump s DAD VL; UltiMate 3000 SD se 7 µl pre-heaterem a 750 µl statickým mixerem; Vanquish Flex quaternary se standardním aktivním ohřevem eluentu.
• Nastavení pro transfer: static mixer 750 µl, sample loop 100 µl, idle volume autosampleru zvýšeno na 68 µl, gradient prestart –0,27 min.
• Pro zvýšení citlivosti volitelné použití Vanquish DAD HL s LightPipe flow cell 10 mm nebo 60 mm.

Hlavní výsledky a diskuse

• Retenční časy šesti analyzovaných látek byly u cílových systémů v rámci ±1,7 % vůči Agilent 1260 Infinity.
• Úpravy GDV (static mixer, sample loop, idle volume, prestart) umožnily přesnou shodu bez změn gradientního programu.
• Rozlišení kritického páru nečistot nad požadavkem USP, tvar špiček s faktor tvaru mezi 0,99 a 1,12.
• Přesnost výšky i plochy špiček lepší než 1 % RSD.
• Signálové zlepšení S/N až desetinásobně při použití LightPipe detektoru s 60 mm flow cell.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlý transfer bez revalidace parametrů gradientu.
• Modulární přístup k nastavení GDV podle cílového přístroje.
• Vysoká citlivost vhodná pro stanovení stopových nečistot.
• Kompatibilita s regulovanými postupy USP a pharmaceutickou kontrolou kvality.

Budoucí trendy a možnosti využití

S rostoucím rozšířením UHPLC technologií lze očekávat vyšší tlaky a rychlosti analýzy. Automatizované nástroje pro kalibraci GDV a softwarové asistenty pro automatický převod metod mezi systémy různých výrobců se stanou standardem. Technologie LightPipe se dále prosadí v oblasti vysoce citlivé detekce.

Závěr

Přenos USP metody acetaminofenu z Agilent 1260 Infinity na UltiMate 3000 SD a Vanquish Flex prokázal, že díky úpravám GDV lze zachovat retenční časy, chromatografické parametry i citlivost detekce. LightPipe detektor nabízí výrazné zlepšení poměru signál šum bez změn v metodických parametrech.

Reference

• Swartz ME Krull I Analytical Method Transfer LCGC North America 2006 24(11) 1204-1214
• Ermer J Limberger M Lis K Wätzig H The transfer of analytical procedures J Pharm Biomed Anal 2013 85 262-276
• Thermo Scientific White Paper An instrument parameter guide for successful UHPLC method transfer 2018
• United States Pharmacopeia USP40 NF35 S2 Acetaminophen method 2017
• USP General Chapter 621 Chromatography The United States Pharmacopeial Convention 2017
• Manka A Franz H Boosting Trace Detection Performance with Vanquish DAD and LightPipe Flow Cell Technical Note 165 2016