Quantification of free metanephrines in human plasma by LC-MS/MS for clinical research

Význam tématu

Výzkum a kvantifikace volných metanefrinů v lidské plazmě je klíčová pro diagnostiku feochromocytomu a dalších chromafinních nádorů.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo implementovat a ověřit LC-MS/MS metodu pro klinický výzkum stanovení volných metanefrinů ve vzorcích lidské plazmy. Použita byla kombinace offline precipitace proteinů a online SPE s chromatografickou separací a selektivní SRM detekcí na triple kvadrupolu.

Použitá metodika a instrumentace

• Příprava vzorku: 100 µL plazmy, precipitace proteinů s následným přidáním deuterovaných interních standardů.
• Online SPE a chromatografie: Vanquish Flex Binary UHPLC se SPE kazetou a analytickou kolónou od RECIPE.
• Detekce: TSQ Altis triple kvadrupol, HESI v pozitivním módu, SRM přechody pro kvantifikaci a potvrzení.
• Analytická sada: ClinMass LC-MS/MS Complete Kit for Free Metanephrines in Plasma – online analysis.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda vykázala lineární odezvu v rozsazích 18–1974 ng/L s váhou 1/X. Bias mezi nominálními a zpětně spočtenými koncentracemi se pohyboval od -8.6 do 4.2 %. Intraassay přesnost byla lepší než 10.2 %CV, interassay lepší než 9.1 %CV. Analýza jednoho vzorku trvá 6 minut.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá doba analýzy umožňuje vysokou propustnost vzorků.
• Vysoká citlivost a spolehlivost díky online SPE a SRM detekci.
• Snížení manuální práce během přípravy vzorků.
• Vhodné pro klinický výzkum a farmakokinetické studie.

Budoucí trendy a možnosti využití

Automatizace přípravy vzorků a rozšíření metody o další katecholaminové metabolity. Integrace s diagnostickými platformami pro rutinní klinické testování. Vývoj multiplexních panelů pro komplexní metabolomiku.

Závěr

Navržená LC-MS/MS metoda poskytuje robustní, citlivé a přesné stanovení volných metanefrinů v lidské plazmě a splňuje požadavky výzkumných laboratoří na linearitu, přesnost a preciznost.