Demonstrate Method Robustness and Seamless Method Transfer, a Step Towards Enabling High Resolution Accurate Mass Multi-Attribute Method for Biotherapeutic QC

Význam tématu

Analytická metoda LC-MS peptide mapping je klíčovým nástrojem při charakterizaci biotherapeutik. Umožňuje současně identifikovat, kvantifikovat a sledovat produktové atributy kvality (PQAs) a nepříměsi během vývoje procesů a uvolňování šarží. Pro zajištění spolehlivých výsledků je nezbytné prokázat robustnost metody a její jednotné chování napříč instrumentálními platformami.

Cíle a přehled studie / článku

Článek popisuje vývoj integrovaného systémového výkonového testu (SET) na bázi předem natrávené vzorku BSA a demonstruje bezproblémový přenos metody pomocí eWorkflow mezi systémy Orbitrap Exploris 240 a Orbitrap Exploris MX. Následně se srovnává výkonnost těchto přístrojů při kvantifikaci PQAs referenčního proteinu NISTmAb.

Použitá metodika a instrumentace

• Příprava vzorků: BSA digest jako pre-digest standard; digest NISTmAb (RM 8671) pro ověření kvantitativních výsledků.
• HPLC: Vanquish UHPLC s kolonnou Hypersil GOLD C18 (150×2,1 mm, 1,9 µm), teplota 25–50 °C, gradientní eluce vody a acetonitrilu s 0,1 % FA, průtok 0,25 mL/min.
• MS: Full MS (m/z 280–1600, rozlišení 120 000) na Orbitrap Exploris 240 a MX; datově závislá MS2 fragmentace na Exploris 240 pro hodnocení fragmentační účinnosti.
• Software a eWorkflow: Chromeleon 7.3.1 pro akvizici, zpracování i reportování; přednastavené metody a reportové šablony v eWorkflows pro snadný přenos mezi laboratořemi.

Hlavní výsledky a diskuse

• SET prokázal vysokou opakovatelnost: hmotnostní přesnost peptidů ≤ 5 ppm, RT RSD ≤ 2 %, peak area RSD ≤ 10 %.
• Mezi přístroji Orbitrap Exploris 240 a MX byla instrument-to-instrument variabilita pod 5 % RSD pro všechny sledované PQAs.
• Srovnání kvantifikace NISTmAb digestu potvrdilo konzistentní výsledky glykozylace, oxidace, deamidace či dalších modifikací.
• Nová špičková detekce v Chromeleon umožnila neomezenou identifikaci nových komponent bez ohledu na složitost vzorku.

Přínosy a praktické využití metody

• Zajištění robustního, validovaného postupu pro rutinní QC laboratoře.
• Snadný přenos metod mezi různými laboratořemi a platformami bez manuálních úprav parametrů.
• Komplexní monitoring klíčových PQAs v jediném pracovním postupu.
• Rychlá identifikace nově vzniklých nepříměsí a změn kvality vzorku.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Automatizace eWorkflows a integrace strojového učení pro optimalizaci metod.
• Rozšíření aplikace na další biologické léčiva, včetně glykokonjugátů a peptidů.
• Propojení s SQC a LIMS pro komplexní správu kvality a dat.
• Další vývoj v oblasti vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrie a zvýšení detekční citlivosti.

Závěr

Integrovaný systémový výkonový test založený na BSA digestu spolu s eWorkflow prokázal vysokou robustnost, opakovatelnost i bezproblémový přenos LC-MS metod pro monitoring PQAs biotherapeutik. Obě platformy, Orbitrap Exploris 240 i MX, poskytují konzistentní výsledky vhodné pro implementaci v QC prostředí.

Reference

1. Thermo Fisher Scientific. A high-resolution accurate mass multi-attribute method for critical quality attribute monitoring and new peak detection. Application Note 72916.