Analysis of Antibiotics in Plasma for Clinical Research

Význam tématu

Analýza antibiotik v plasmě je klíčová pro pochopení farmakokinetiky a farmakodynamiky při klinickém výzkumu a monitorování léčby infekcí.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout rychlou a jednoduchou metodu pro současné stanovení 16 antibiotik různých polarit v lidské plasmě pomocí precipitace proteinů a následné UPLC MS/MS analýzy.

Použitá metodika

• Precipitace proteinů: 50 µl plasmy, 150 µl interních standardů v methanolu, vortex, centrifugace, přenos supernatantu a ředění vodou s formiovou kyselinou.
• Analýza ve dvou sadách: Set 1 zahrnoval cefazolin, cefepim, ciprofloxacin, clindamycin, flucloxacilin, linezolid, meropenem a piperacilin; Set 2 ampicilin, azithromycin, cefotaxim, ceftazidim, chloramfenikol, daptomycin, sulbactam a tazobactam.

Použitá instrumentace

• UPLC: Waters ACQUITY UPLC I-Class s kolonkou BEH C18 (2,1×100 mm, 1,7 µm).
• MS/MS: Waters Xevo TQD s ESI polaritou přepínanou v módu MRM.
• Softwarová podpora: MassLynx v4.2 a TargetLynx.

Hlavní výsledky a diskuse

• Žádné zásahy nosného systému po analýze nejvyšší koncentrace.
• Citlivost: přesnost ≤20 % CV, bias ≤15 % pro LLOQ, validní pro klinický výzkum.
• Opakovatelnost a celková přesnost ≤12,5 % RSD při třech úrovních QC.
• Kalibrační křivky: lineární pro některá antibiotika, kvadratické fit pro zbývající.
• Matrix efekt kompenzován stabilně značenými interními standardy.
• Žádné významné interference od endogenních látek.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá analýza do 5,5 minut včetně injekcí.
• Nízký objem vzorku a jednoduchá příprava.
• Široké spektrum antibiotik vhodné pro farmakokinetické studie QA/QC pracovišť.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření panelu o nové antibiotika a antivirotika.
• Automatizace přípravy vzorků pro vysokoprůchodové aplikace.
• Integrace s klinickými studiemi pro personalizovanou medicínu.

Závěr

Vyvinutá metoda kombinuje jednoduchou přípravu vzorku, rychlou UPLC separaci a citlivou MS detekci a je vhodná pro kvalitativní i kvantitativní analýzu antibiotik v plasmě v rámci klinického výzkumu.

Reference

• Balloch S, Calton LJ, Hammond G. Analysis of Antibiotics in Plasma for Clinical Research. Waters Corporation, 2021.