Recovery of Metal-Sensitive Analytes on the Arc Premier Solution: System-to-System Reproducibility and a Multi-System Comparison to Conventional LC

Význam tématu

Metalově citlivé látky, zejména phosphorylované sloučeniny, mohou během chromatografické analýzy silně interagovat se zobrazovacími povrchy a kovovými částmi systému. To vede k nízké rekuperaci, špatné opakovatelnosti a zhoršené přesnosti výsledků. Řešení založená na pasivaci systému či přidávání iontových par v mobilní fázi jsou zdlouhavá a nemusí být kompatibilní s detekčními technikami.

Cíle a přehled studie

Cílem této studie bylo ověřit reprodukovatelnost a citlivost řešení Arc Premier Solution vybaveného povrchy MaxPeak High Performance Surfaces (HPS) ve srovnání s konvenčními LC systémy. Studie se zaměřila na sadu sloučenin obsahujících od adenosinu po ATP a ADP a na steroidní fosfáty. Prověřila se mezisystémová variabilita, přesnost kvantifikace a statistická významnost rozdílů.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika zahrnovala dvě základní skupiny analýz:

• Metoda 1: Adenosin, ADP, ATP (koncentrace 0,2–200 µg/mL, detekce UV při 260 nm, kolona XSelect Premier HSS T3 XP 2,5 µm 4,6×50 mm, teplota kolony 40 °C, objem injekce 15 µL, gradient 1–95 % fáze B během 7 minut).
• Metoda 2: Hydrokortisonfosfát, deksametazon, deksametazonfosfát, deksametazonacetát (koncentrace 7,5–25 µg/mL, detekce UV při 260 nm, kolona XBridge Premier BEH C18 2,5 µm 4,6×50 mm, teplota kolony 40 °C, objem injekce 30 µL, gradient 18–50 % fáze B během 4 minut).

Použitá instrumentace:

• HPLC systémy Arc Premier QSM-R a Arc Premier FTN-R s povrchy MaxPeak HPS
• Conventional LC systémy s nerezovými komponentami
• Detektory UV/Vis 2489 a PDA 2998
• Aktivní ohřev kolony a chladicí modul vzorků (10 °C)

Hlavní výsledky a diskuse

Mezisystémová přesnost na třech Arc Premier systémech dosahovala hodnot %RSD ≤ 0,28 % pro všechny analyty. Průměrné peak arey byly mezi systémy vyrovnané v rozpětí 0,9–2,2 % (fosfátové sloučeniny) a ≤ 1 % (nefosfátové).
V porovnání s konvenčním LC řešením byla u slabě adsorbujících látek (adenosin) rekuperace srovnatelná. U ATP a ADP však Arc Premier prokázalo výrazně vyšší signál a nižší LOQ bez nutnosti pasivace či iontových párů. Konvenční systémy často nevykazovaly duté špičky při nízkých koncentracích.
Statistická analýza (t-test) potvrdila významně nižší variabilitu Arc Premier systému pro ATP a ADP (p < 0,01). Celkově Arc Premier poskytuje 8×–63× lepší přesnost než nerezová LC technologie v závislosti na analytech.

Přínosy a praktické využití metody

Arc Premier Solution výrazně zjednodušuje analýzu kovově citlivých sloučenin, eliminuje potřebu složitého předúpravy systému a metodických modifikací, zvyšuje laboratorní propustnost a spolehlivost výsledků. Hodí se pro QA/QC workflow, farmaceutické a biochemické laboratoře zaměřené na jóbinding sloučeniny.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření technologie MaxPeak HPS na další typy kovově interagujících molekul včetně peptidů a oligonukleotidů. Integrace s hmotnostní spektrometrií a mikro-LC systémy umožní vyšší citlivost a šetření vzorku. Další vývoj povrchů a materiálů povede k ještě univerzálnějším a odolnějším analytickým platformám.

Závěr

Arc Premier Solution s technologií MaxPeak HPS poskytuje vynikající mezi-systémovou reprodukovatelnost, vyšší rekuperaci a citlivost pro kovově citlivé analyty ve srovnání s konvenční nerezovou LC. Získané výsledky potvrzují robustnost a spolehlivost tohoto řešení pro rutinní analýzy v moderních laboratořích.

Reference

• Zhimin Li, Dhvani Shah, Anthony Dovell, Will Martin, Chris Grzonka, Jason Dyke a kol. Challenge Accepted: Arc Premier System Increases Sensitivity and Reproducibility for Hard-to-See Compounds. Waters Application Note 720007267EN, červen 2021.