Drug Analysis in Human Urine Using Agilent Chem Elut S Supported Liquid Extraction by LC/MS/MS

Význam tématu

Rychlé a spolehlivé stanovení léků v moči je klíčové pro klinický výzkum, farmakokinetiku a monitorování pacientů. Vysoká kvalita přípravy vzorku a efektivní eliminace interferujících složek zajišťují přesnost a reprodukovatelnost analytických výsledků.

Cíle a přehled studie

Tato studie demonstruje využití nového podpůrného sorbentu Agilent Chem Elut S ve formátu 96-jamkové destičky pro kvantitativní analýzu 24 léčiv v lidské moči metodou LC/MS/MS. Hlavním záměrem bylo porovnat výkon Chem Elut S se standardními LLE a diatomitovou SLE.

Použitá metodika a instrumentace

• Enzymatická hydrolýza β-glukuronidázou pro uvolnění konjugovaných analytů.
• Podpůrná kapalinová extrakce (SLE) s Agilent Chem Elut S 400 µL destičkami. Aplikace vzorku, pětiminutová equilibrace, dvojí eluční krok methyl-tert-butyl ether (MTBE), sušení a rekonstituce v 85:15 mobile phase A:ACN.
• Instrumentace pro separaci a detekci: Agilent 1290 Infinity LC (kvartérní pumpa, autosampler, chromatografická kolona Poroshell 120 EC-C8 2,1×100 mm s C18 guard) a Agilent 6490 Triple Quadrupole LC/MS s iFunnel v režimu Dynamic MRM.
• Příprava standardů a QC: matričně vázané kalibrační křivky 0,1–20 ng/mL, tři úrovně QC a interní standardy označené deuteriem.

Hlavní výsledky a diskuse

• Linearity: korelační koeficienty R2 0,991–0,999 pro všechny analyty.
• Recoveries: 79–117 % s RSD < 20 % u všech sloučenin kromě proadifenu (~53 % recovery, RSD 11 %).
• Limit of quantitation (LOQ): 0,1 ng/mL (u amphetaminu a heroinu LOQ 0,5 ng/mL).
• Porovnání metod: Chem Elut S dosahuje lepších recoverií a nižší variability než LLE a diatomitová SLE; výrazné zkrácení doby přípravy a usnadněná automatizace.

Přínosy a praktické využití metody

• Zvýšená propustnost a reprodukovatelnost při přípravě vzorků biologických matric.
• Čistější extrakty s minimálním vlivem solí a fosfolipidů na LC/MS/MS analýzu.
• Vhodné pro rutinní QA/QC, klinický výzkum a toxikologické stanovení.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření aplikace na další biologické vzorky – plazmu, sérum.
• Integrace s robotickými platformami a miniaturizace sorbentových formátů.
• Použití ekologičtějších rozpouštědel a optimalizace spotřeby organických fází.

Závěr

Agilent Chem Elut S představuje robustní, rychlou a snadno automatizovatelnou alternativu k tradičním extrakčním postupům, přinášející vysokou spolehlivost, konzistentní recoverie a efektivní eliminaci interferujících složek při stanovení léků v moči.

Reference

• Zhao L. Quantitative Determination of a Panel of Endogenous Steroids in Human Serum by LC/MS/MS using Agilent Supported Liquid Extraction (SLE) Chem Elut S Plate. Agilent Technologies Application Note, 5994-0949EN.