Quantitation of Benzodiazepines in Serum by UHPLC-Triple Quadrupole Mass Spectrometry

Význam tématu

Benzodiazepiny a tzv. Z-léky jsou široce předepisované s účinky na uspání, úzkost, svalový relax a antikonvulzivní aktivitu. Kvantifikace těchto látek v séru je klíčová pro sledování terapie, forenzní toxikologii a prevenci zneužívání vzhledem k riziku závislosti, úzkému terapeutickému oknu a možné kumulaci aktivních metabolitů.

Cíle a přehled studie / článku

Studie si klade za cíl vyvinout jednoduchou, rychlou a spolehlivou metodu pro simultánní detekci a kvantifikaci 35 benzodiazepinů a Z-léků v lidském séru za použití Bruker Elute UHPLC spojeného s EVOQ LC-TQ Elite MS/MS.

Použitá metodika

Vzorky: 50 µl séra, proteinová precipitace reagenciemi ClinMass TDM kitu s izotopovými interními standardy.
Chromatografie: gradientní eluce na Bruker Elute UHPLC, mobilní fáze z ClinMass kitu, průtok 600 µl/min, objem injekce 3 µl, teplota kolony 40 °C, doba běhu 6,8 minuty.

Použitá instrumentace

EVOQ LC-TQ Elite MS/MS systém s VIP H-ESI ionizací v pozitivním režimu (4500 V), plynné podmínky: nebulizační plyn 50 jednotek, probe gas 50 jednotek při 350 °C, cone gas 25 jednotek při 350 °C, kolizní plyn argon 1,5 mTorr.

Hlavní výsledky a diskuse

• Chromatografické rozlišení 35 sloučenin během 6,8 min s reprodukovatelnými retenčními časy.
• Linearity kalibračních křivek s koeficienty determinace R² v rozmezí 0,9931–1,0000.
• Přesnost bias většinou v rámci ±10 % (maximálně 16,3 %) a opakovatelnost (RSD) pod 9 % pro QC vzorky.
• Nízké množství potřebného séra (50 µl) umožňuje vysokou propustnost a ekonomiku analýzy.

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoká propustnost laboratorních vzorků díky krátkému běhu a jednoduché přípravě.
• Možnost simultánního sledování širokého spektra benzodiazepinů a Z-léků.
• Vhodné pro klinickou toxikologii, terapeutické monitorování a forenzní aplikace.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření panelu o další psychoaktivní látky a metabolity.
• Automatizace přípravy vzorků a integrace do laboratorních informačních systémů.
• Využití v populačních studiích farmakokinetiky a farmakodynamiky.

Závěr

Navržená metoda kombinuje jednoduchou přípravu s vysokou citlivostí a reprodukovatelností detekce 35 benzodiazepinů v séru. Vynikající linearita, přesnost i opakovatelnost potvrzují její vhodnost pro klinické, forenzní a výzkumné laboratoře vyžadující vysoký provozní výkon.

Reference

• RECIPE Chemicals + Instruments GmbH. ClinMass TDM Kit Instructions, Munich, Germany.
• Bruker Daltonik GmbH. Application Note LCMS-138.
• Bruker Daltonik GmbH. Application Note LCMS-139.
• Bruker Daltonik GmbH. Application Note LCMS-145.
• Bruker Daltonik GmbH. Application Note LCMS-147.