Agilent AdvanceBio SEC for Peptides, Proteins & ADC Analysis

Význam tématu

Size-exclusion chromatography (SEC) je nezbytnou technikou pro rozdělení proteinů, peptidů a konjugátů lék–protein podle velikosti. Klíčové je omezit nespecifické interakce se stacionární fází, aby se zachovala integrita vzorku a přesnost analýzy.

Cíle a přehled studie / článku

Studie porovnává kolony Agilent AdvanceBio SEC s konkurenčními Waters Acquity BEH pro analýzu lidského růstového hormonu a ADC. Cílem je ukázat, jak hydrofilní povlak AdvanceBio minimalizuje sekundární interakce a zlepšuje rozlišení a návratnost vzorku.

Použitá metodika a instrumentace

Instrumentace

• LC systém: Agilent 1260 Infinity II Bio-inert LC
• Software: Agilent OpenLab CDS
• Průtok: 0,35 ml/min, teplota 25 °C, injekční objem 2 µl, detekce UV 220 nm

Metodika

• Eluenty: 150 mM fosfát pH 7,0 pro HGH; 50 mM fosfát s 200 mM NaCl pH 7,0 pro ADC
• Kolony: AdvanceBio SEC 120 Å a 200 Å, 1,9 µm vs. Waters Acquity BEH 125 Å/200 Å, 1,7 µm
• Vzorky: Humánní růstový hormon a Sigma MAb ADC, koncentrace 1 mg/ml

Hlavní výsledky a diskuse

Chromatogramy ukázaly u AdvanceBio SEC menší zpoždění eluování, lepší rozlišení monomeru, dimeru a fragmentů a vyšší návratnost vzorku. Waters kolona vykazovala dělení monomerového píku, nižší rozlišení nízkomolekulárních forem a horší návratnost.

Přínosy a praktické využití metody

AdvanceBio SEC kolony eliminují nutnost úprav metody pro „lepkavé“ vzorky typu ADC. Výsledkem je spolehlivější kvantifikace a charakterizace bioterapeutik, což zvyšuje efektivitu QA/QC procesů a výzkumných analýz.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj se zaměří na nové povlaky pro úplné potlačení nespecifických interakcí a kompatibilitu s hyphenovanými technikami (SEC–MALS, SEC–MS). Rozšíření aplikací na komplexní bioterapeutika a nanovzorky přispěje k hlubší charakterizaci.

Závěr

Agilent AdvanceBio SEC kolony díky speciálnímu hydrofilnímu povlaku minimalizují sekundární interakce, čímž zajišťují vyšší návratnost vzorku a precizní rozlišení proteinů a ADC. Tato vlastnost snižuje dobu vývoje metod a zvyšuje spolehlivost analytických výsledků.

Reference