Simple and Quick Analysis of Theanine in Tea by Automatic Pre-Column Derivatization Method

Význam tématu

Obsah theaninu, klíčové aminokyseliny s umami chutí v čaji, významně ovlivňuje jeho senzorické vlastnosti a kvalitu. Díky svým relaxačním a stres- zmírňujícím účinkům se theanin stává předmětem zájmu jak výzkumných pracovišť, tak potravinářského a farmaceutického průmyslu.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout jednoduchý a rychlý HPLC postup pro simultánní stanovení theaninu a dalších hlavních aminokyselin v různých typech čajových vzorků. Metoda využívá automatickou pre-column derivatizaci v režimu co-injection na systému Nexera Series.

Použitá metodika a instrumentace

Ultrarychlý gradientní rozvod v nízkotlakém režimu na kolóně Shim-pack XR-ODS (100 mm × 3 mm, 2,2 μm). Mobilní fáze sestávala z:

• 20 mmol/L acetátového pufru pH 6
• vody/acetonitrilu (1:9)
• 20 mmol/L acetátového pufru pH 5 s 0,5 mmol/L EDTA

Derivatizační činidla připravena v borátovém pufru pH 9: o-ftalaldehyd (OPA) a 3-merkaptopropionová kyselina (MPA) smíchané v poměru 1:1. Detekce fluorescentní při Ex 350 nm a Em 450 nm. Inj. objem 1 μL, teplota kolony 40 °C, průtok 1,0 mL/min. Analytický systém: Shimadzu Nexera Series s funkcí co-injection pre-column derivatizace.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila rozdělení 20 proteinogenních aminokyselin, včetně theaninu, do 15 minut. Kalibrační křivky šesti klíčových aminokyselin vykázaly výbornou linearitu (R2 > 0,9997) v rozsahu 0,25–25 μmol/L a opakovatelnost ploch (n=6) s RSD pod 1,3 %. Analýza pěti typů čajů (kabusecha, sencha, balený zelený čaj, oolong, černý čaj) ukázala rozdílné profilování aminokyselin podle způsobu zpracování listů.

Přínosy a praktické využití metody

Významnou výhodou je eliminace manuální derivatizační přípravy vzorků a složitého přístrojového uspořádání. Zvýšení propustnosti analytické práce je přínosné pro rutinní QA/QC laboratoře, výzkumné projekty i potravinářskou kontrolu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Možnosti dalšího rozvoje zahrnují:

• Aplikaci na různé potravinové a biologické matrice
• Kombinaci s UHPLC-MS pro další potvrzení identity
• Vysokopropustné screeningové platformy a plnou automatizaci přípravy vzorků

Závěr

Navržená metoda automatické pre-column derivatizace nabízí rychlou, přesnou a vysoce opakovatelnou analýzu theaninu a doprovodných aminokyselin v čajích bez zbytečných manuálních kroků. Je vhodná pro široké spektrum aplikací od výzkumu až po rutinní kontrolu kvality.

Reference

1. Yoshioka T. Simple and Quick Analysis of Theanine in Tea by Automatic Pre-Column Derivatization Method. Shimadzu Application News L544, 2019.