Determination of genotoxic nitrosamines in Valsartan with gas chromatography and mass spectrometry

Význam tématu

Detekce nitrosaminů v léčivu valsartan má klíčový význam pro zajištění bezpečnosti pacientů. N-nitrosodimethylamin (NDMA) a N-nitrosodiethylamin (NDEA) jsou klasifikovány jako pravděpodobné karcinogeny a zákonem stanovené limity pro jejich přítomnost ve farmaceutických přípravcích jsou extrémně nízké. Citlivá a selektivní analýza těchto genotoxických nečistot je proto nezbytná pro splnění mezinárodních regulačních požadavků (ICH M7, FDA, EMA, Čínská farmakopej).

Cíle a přehled studie / článku

Cílem aplikace bylo ověřit tři analytické přístupy pro kvantifikaci NDMA a NDEA ve valsartanu: 1) kapalná injekce GC-MS podle čínské farmakopeje, 2) headspace GC-MS s jednou kvadrupólou podle metodiky US-FDA, a 3) přímá injekce s GC-MS/MS na triple kvadrupólu doporučenou US-FDA. Studie porovnává citlivost, linearitu, opakovatelnost a praktickou proveditelnost jednotlivých metod.

Použitá instrumentace

• GC model TRACE 1310 s inletem Split/Splitless
• ISQ 7000 Single Quadrupole MS pro GC-MS analýzy
• TriPlus 500 Headspace autosampler pro HS-GC-MS
• TSQ 9000 Triple Quadrupole MS s ExtractaBrite ion source pro GC-MS/MS
• Chromeleon CDS 7.2 pro sběr a zpracování dat

Použitá metodika

Vzorky valsartanu byly extrahovány methanolem, DMSO nebo DCM dle příslušné metody. Pro HS-GC-MS se lék rozpouštěl v DMSO a inkuboval při 150 °C; pro kapalnou injekci se vzorky připravovaly ultrazvukem a následně filtrováním. Standardní roztoky NDMA a NDEA s koncentracemi 0,005–100 ppb (ng/mL) sloužily k ověření linearity a citlivosti.

Hlavní výsledky a diskuse

• Linearity: Koeficienty determinace R2 > 0,998 pro všechny metody na rozsahu 1–100 ppb odpovídají regulačním požadavkům.
• Citlivost: LOQ 0,6–1,5 ppb pro NDMA a 0,8–3,1 ppb pro NDEA, LOD pod 0,3 ppb, tedy výrazně pod povolenými limity 0,3 ppm (NDMA) a 0,08 ppm (NDEA).
• Opakovatelnost: %RSD plochy špiček 1,3–2,8 % při n=6 opakovaných injekcích splňuje požadavek < 5 %.
• Recovery: Schválené hodnoty 84–108 % při spike testech (5, 30, 100 ppb) dokazují adekvátní návratnost analytů z matrice valsartanu.
• Specifičnost: GC-MS/MS metoda poskytuje nejvyšší selektivitu a citlivost díky SRM přechodům, vhodná pro náročné matice.

Přínosy a praktické využití metody

Demonstrované metody nabízejí dostatečnou citlivost i pro nejnižší regulační limity genotoxických nečistot. Flexibilní volba mezi GC-MS, HS-GC-MS a GC-MS/MS umožňuje laboratořím optimalizaci analytického protokolu podle technického vybavení, finančních možností a požadavků na průtok vzorků.

Budoucí trendy a možnosti využití

Dalším směrem je využití vysoce selektivních technik s vysokým rozlišením (HR-MS) pro komplexní screening neznámých nitrosaminů. Automatizované headspace systémy a miniaturizace přípravy vzorků mohou zvýšit produktivitu a spolehlivost laboratorní práce. Integrace AI-řízené zpracování dat zvyšuje efektivitu detekce stopových úrovní.

Závěr

Porovnané přístupy pro stanovení NDMA a NDEA ve valsartanu prokázaly shodu s celosvětovými regulačními požadavky. GC-MS/MS metoda nabízí nejvyšší citlivost a selektivitu, zatímco kapalná injekce a headspace GC-MS zůstávají životaschopnými alternativami pro rutinní analýzy. Implementace těchto metod usnadňuje farmaceutickému průmyslu kontrolu bezpečnosti a kvality leků.

Reference

• http://www.chp.org.cn/view/ff80808164eede7e016545903eea6d2f?a=BZHXYP
• https://www.fda.gov/downloads/Drugs/DrugSafety/UCM618053.pdf
• https://www.fda.gov/downloads/Drugs/DrugSafety/UCM623198.pdf
• https://www.fda.gov/downloads/Drugs/DrugSafety/UCM623578.pdf