Determination of genotoxic nitrosamines in Valsartan with gas chromatography and mass spectrometry

Význam tématu

Genotoxické nitrosaminy jako N-nitrosodimethylamin (NDMA) a N-nitrosodiethylamin (NDEA) patří mezi potenciálně karcinogenní nečistoty v léčivých přípravcích, především ve Valsartanu. Jejich spolehlivá detekce a kvantifikace pod hranicí toxicologických limitů je klíčová pro zajištění bezpečnosti pacientů a splnění přísných regulačních požadavků.

Cíle a přehled studie

Studie hodnotí výkonnost tří analytických přístupů podle metod Čínské farmakopeje (C-FDA) a americké FDA: přímá kapalná injekce GC-MS, headspace GC-MS a přímá kapalná injekce GC-MS/MS. Cílem bylo porovnat citlivost, selektivitu, přesnost a robustnost metod pro detekci NDMA a NDEA ve vzorcích Valsartanu.

Použitá instrumentace

• Thermo Scientific TRACE 1310 GC
• Thermo Scientific ISQ 7000 Single Quadrupole MS
• Thermo Scientific TSQ 9000 Triple Quadrupole MS
• Thermo Scientific TriPlus 500 HS Autosampler
• Chromeleon 7.2 Chromatography Data System

Použitá metodika

Byly testovány tyto přístupy:

• Kapalná injekce GC-MS podle C-FDA s extrakcí methanolem, sledováním NDMA (SIM režim).
• Headspace GC-MS podle US-FDA metod 1 a 2 s rozpouštědly DMSO nebo NMP pro detekci NDMA a NDEA (SIM režim).
• Kapalinová injekce GC-MS/MS podle US-FDA s použitím chloroformu, analyzou v SRM režimu s deuterovanými standardy (t-SRM).

Každá metoda zahrnovala test systémové způsobilosti, stanovení linearity (1–100 ppb), citlivosti (LOD, LOQ), opakovatelnosti a průkaznosti (recoveries) ve vzorcích Valsartanu.

Hlavní výsledky a diskuse

Všechny metody splnily regulatorní požadavky:

• Linearity R2 > 0,998 pro obě látky.
• LOQ v rozmezí 0,6–3,1 ppb (odpovídá 0,006–0,03 ppm ve vzorku).
• Opakovatelnost < 5 % RSD.
• Recovery NDMA a NDEA v rozmezí 84–108 % při spike úrovních 5–100 ppb.
• V neobsahových (unspiked) vzorcích se koncentrace NDMA a NDEA pohybovaly pod detekčními limity nebo výrazně níže než akceptovatelné limity (0,3 a 0,08 ppm).

GC-MS/MS metoda prokázala nejvyšší citlivost a selektivitu zejména pro NDEA.

Přínosy a praktické využití metody

Metody poskytují laboratořím flexibilitu při výběru přístrojového vybavení a reagují na rozdílné požadavky regulačních úřadů. Vysoká citlivost a robustnost zajišťují spolehlivou kontrolu genotoxických nečistot během výroby a při konečné kontrole léčiv.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření metod GC-MS/MS s vyšší úrovní automatizace a integrace s pokročilou datovou analýzou. Dále lze očekávat vývoj derivatizačních postupů a alternativních ionizačních technik pro snížení matrix interference a zrychlení odběru vzorků.

Závěr

Thermo Fisher Scientific platformy GC-MS, HS-GC-MS a GC-MS/MS prokázaly schopnost detekovat NDMA a NDEA ve Valsartanu s vysokou citlivostí, opakovatelností a v souladu s požadavky C-FDA a US-FDA. Implementace těchto metod ve výrobních a kontrolních laboratořích posiluje kvalitu a bezpečnost léčiv.

Reference

1. Čínská farmakopej. Metoda pro detekci nitrosaminů ve Valsartanu.
2. FDA. GC-MS headspace metoda pro NDMA ve Valsartanu drug substance.
3. FDA. Combined HS-GC-MS impurity assay for NDMA and NDEA.
4. FDA. GC-MS/MS direct injection assay pro NDMA a NDEA.