Ultrafast Method for Simultaneous Measurement of Triazole Antifungals in Human Serum Using Online SPE/MS/MS

Význam tématu

Přesná a rychlá kvantifikace triazolových antifungálních látek v lidské séru je klíčová pro terapeutické monitorování a farmakokinetické studie. Tradiční HPLC a LC/MS/MS metody jsou často časově náročné a spotřebují velké objemy rozpouštědel. Ultrafast SPE/MS/MS postup nabízí výrazné zkrácení doby analýzy a efektivní použití prostředků.

Cíle a přehled studie / článku

Vyvinout robustní online SPE/MS/MS metodu s ultrarychlou in-line extrakcí a kvantifikací pěti triazolových antifung (voriconazol, ketokonazol, flukonazol, itrakonazol, posakonazol) v lidské séru. Metoda má umožnit vysokou propustnost (>240 vzorků/h), spolehlivost a minimalizaci rozpouštědel oproti tradičním metodám.

Použitá metodika a instrumentace

Proteinová precipitace s acetonitrilem následované 10× ředěním v 2 % roztoku amonného hydroxidu. Online SPE pomocí Agilent RapidFire 365 s reverzní C18 cartridgem (G9205A) a Agilent 6460 Triple Quadrupole MS ve čtyřech RF stavech. Mobilní fáze: 10 mM amonný acetát/0,1 % kyseliny mravenčí/0,01 % TFA (pumpa 1) a čistý methanol (pumpy 2 a 3). Ionizace ESI+ a MRM monitorování kvantifikátorových a kvalifikátorových iontů. Software: MassHunter Triple Quadrupole Acquisition, Qualitative Analysis, Quantitative Analysis a RapidFire Acquisition.

Hlavní výsledky a diskuse

Ultrafast SPE/MS/MS metoda dosahuje rychlosti 14 s/vzorek (>240 vzorků/h). Lineární rozsah 0,2–25 µg/mL se R2 > 0,995 pro všechny analyty. Intraday a interday přesnost do ±10 % a variabilita (CV) < 10 %. Carryover < 5 % potvrzeno na slepém vzorku. Robustnost demonstrovala stabilní odezvu přes ≥ 2000 po sobě jdoucích injekcí s CV 2,3–6,9 %.

Přínosy a praktické využití metody

• Více než 10násobné zkrácení času analýzy a snížení spotřeby rozpouštědel.
• Vysoká propustnost usnadňuje klinickou praxi a farmakokinetické studie.
• Jednoduchá příprava vzorků vhodná pro rutinní i výzkumné laboratoře.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšíření panelu sledovaných látek, připojení k plně automatizovaným pracovním postupům, vývoj multiplexních testů pro širší spektrum léčiv, integrace s laboratorními informačními systémy, optimalizace pro mikroobjemy biologických vzorků.

Závěr

Navržená ultrarychlá online SPE/MS/MS metoda nabízí přesné, robustní a velmi rychlé stanovení pěti triazolových antifung v lidské séru. Díky vysoké propustnosti a úsporám na spotřebě rozpouštědel představuje efektivní alternativu k tradičním HPLC a LC/MS/MS metodám pro klinické a výzkumné aplikace.

Reference

• Verdier, M.-C.; et al. Clin. Chem. Lab. Med. 2010, 48(10), 1515–1522.
• Czasopismo, B.; et al. Clinica Chimica Acta 2012, 413, 240–245.