Peptide Mapping on Monoclonal Antibodies Using Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF and Protein Metrics Byos Software

Význam tématu

Peptidove mapovani monoclonalnich protilatek se stalo klicovou metodou pro charakterizaci a kvantifikaci bioterapeutik. Umoznuje sledovat modifikace, jako je deamidace ci oxidace, ktere ovlivnuji ucinnost a bezpecnost leciv. Implementace jednotneho workflow zajistuje vyssi reprodukovatelnost a efektivni kontrolu kvality.

Cíle a přehled studie

Studie si klade za cíl demonstrovat integrovanou proceduru pro peptidove mapovani: pripravu vzorku, separaci, akvizici LC Q-TOF dat a jejich zpracovani ve vendor-neutralnim softwaru Protein Metrics Byos. Porovnany jsou kontrolni vzorky s chemicky stresovanymi (deamidovane a oxidovane) NISTmAb.

Použitá metodika a instrumentace

Priprava vzorku:

• Chemicka indukce deamidace pri 37 °C v Tris-HCl pH 8,7 po dobu 6 dnu
• Oxidace v Tris-HCl pufru s 0,002 % H2O2 pres noc pri laboratorni teplote
• Redukce, alkylace iodoacetamidem a trypsinova digesce
• Desalting pomoci Agilent AssayMAP Bravo

Separace a akvizice:

• Agilent 1290 Infinity II LC se ZORBAX RRHD C18 kolonkou (2,1×150 mm, 1,8 µm)
• Gradient od 1 % do 90 % ACN s 0,1 % kyseliny mravenčí, prutok 0,25 mL/min, teplota 50 °C
• Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF s Dual Jet Stream ESI zdrojem

Zpracovani dat:

• Protein Metrics Byos MAM workflow pro identifikaci sekvencí a PTM
• Automatická anotace chromatogramu, zarovnani a porovnani pruhlovych ploch

Hlavní výsledky a diskuse

Workflow dosahuje proteinyho pokryti vice nez 98 % pro tezky retezec a 94 % pro lehky retezec. Software Byos umoznuje rychlou kontrolu chromatogramu a hmotnostnich spekter, automaticke vyznaceni CQAs a porovnani kontrolniho a chemicky stresovaneho vzorku. Nalezena byla znacna deamidace na residuu Asn a zvysena oxidace specifickych peptidu, ktere byly automaticky vyznaceny cervene.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda zajistuje:

• Reprodukovatelne, plne automatizovane pripravy vzorku
• Vysokou kvalitu a presnost LC/MS dat
• Unifikovane zpracovani dat z ruznych zdroju
• Efektivni monitorovani klicovych atributu bioterapeutik

Budoucí trendy a možnosti využití

Rostouci zajem o multi-attribute metodu (MAM) podpori dalsi automatizaci a rozsirenou evidenci PTM. Vendor-neutralni platformy jako Byos budou klíčove pro integraci ruznorodych analyz a benefitují oblasti QC, vyvoje biosimilar a de novo sekvencovani.

Závěr

Popsane workflow spojujici Agilent instrumenty a Protein Metrics Byos poskytuje komplexni reseni pro peptidove mapovani a kvantitativni sledovani modifikaci monoclonalnich protilatek. Metoda zlepsuje reprodukovatelnost, snizuje ruční zasahy a urychluje rozhodovaci procesy v biopharma vyvoji.

Reference

1. Rogers RS et al. A View on the Importance of Multi-Attribute Method for Measuring Purity of Biopharmaceuticals and Improving Overall Control Strategy. The AAPS Journal 2018;20:7.
2. Automation of Sample Preparation for Accurate and Scalable Quantification and Characterization of Biotherapeutic Proteins Using the Agilent AssayMAP Bravo Platform. Agilent Technologies application note 5991-4872EN 2016.
3. Quantitation of Chemical-Induced Deamidation and Oxidation on Monoclonal Antibodies Using Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF and Agilent MassHunter BioConfirm Software. Agilent Technologies application note 5994-0406EN 2018.