Rapid, sensitive and robust UHPLC-LC/MS/MS-screening for 60 drugs of abuse in oral fluids

Význam tématu

Screening drog ve slinných vzorcích představuje moderní alternativu k testování v moči, která přináší snazší odběr, nižší riziko manipulace a možnost monitorovat krátkodobou i dlouhodobou expozici. Použití UHPLC-LC/MS/MS umožňuje zachytit široké spektrum látek včetně rodičovských drog, jejich metabolitů a přídavných látek v jediném šetření.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout rychlou, citlivou a robustní metodu pro detekci 60 běžně zneužívaných látek a jejich metabolitů ve slinách během šesti minut analýzy. Zvláštní důraz byl kladen na sledování spotřeby heroinu včetně jeho charakteristických biologických stop a kombinací s dalšími substancemi.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda zahrnuje jednoduchou přípravu vzorku slin s použitím:

• SCS pH 4.2 Greiner Bio-One pro sběr slin
• Imunoanalýzu alfa-amylázy na AU680 pro potvrzení autenticity slin
• Ukázkovou přípravu: přidání deuterovaných standardů, sulfo-salicylové kyseliny, acetonitrilu a amonných solí, následnou centrifugaci, odpaření a rekonstituci

Analýzu provádí UHPLC systém Nexera X2 spojený s triple-quadrupolovým spektrometrem LCMS-8050. Klíčové parametry:

• Mobile phase: 5 mM methanolu a formátu s 0,1 % formičné kyseliny
• Phenyl-fázová kolona 1,7 µm, 2,1×150 mm, teplota 60 °C
• Gradientní program 0,5 až 5 minut
• Detekce MRMs s pěti tranzicemi na analyte včetně dvou pro deuterované interní standardy

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosahuje lineárity v rozsahu 0,05–20 ng/ml (některé látky 0,1–20 ng/ml) s korelačními koeficienty r² v rozsahu 0,995–1,000. Chromatogram čtyřiceti šesti analyzovaných vzorků ukazuje jasné rozlišení a nízké meze detekce. U pozitivního vzorku „street“ heroinu se prokázal panel typických markerů (6-acetylmorphine, morphine, codeine, norcodeine, 6-acetylcodeine) spolu s kokainem a jeho metabolity.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje:

• Rychlé vyhodnocení kombinované spotřeby více látek během 6 minut
• Citlivé sledování rodičovských drog i metabolitů
• Vysoce reprodukovatelné výsledky v QA/QC a klinické toxikologii

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekávaný vývoj zahrnuje rozšíření panelu o nové psychoaktivní látky, integraci s point-of-care přístroji, automatizaci přípravy vzorků a využití umělé inteligence pro rychlou interpretaci dat. Dále je perspektivní spojení s mobilními sběrnými systémy a online monitoringem.

Závěr

Popsaná UHPLC-LC/MS/MS metoda nabízí univerzální, rychlou a spolehlivou cestu pro rutinní screening 60 drog zneužívaných ve slinách. Díky vysoké citlivosti a krátkému analytickému čase je vhodná pro klinické, forenzní i zaměstnanecké testování.

Reference

• Böttcher M. Oral fluid as an alternative matrix for monitoring licit and illicit drug abuse. Workshop Nal von Minden/Chiron, 2015
• Reisfield G.M. Metabolic pathways of heroin. Ann Clin Lab Sci, 2007;37(4):301–314
• Böttcher M., Lierheimer S. Comparison of UPLC-MS/MS screening in oral fluid and urine with immunoassay. SOFT, 2012
• Böttcher M., Guenther N., Lierheimer S., Beck O. Multi-target screening of 55 drugs in oral fluid. TIAFT, 2013