Ultrafast Analysis of Levetiracetam in Serum Using the Agilent RapidFire High-Throughput Mass Spectrometry System

Význam tématu

Analýza koncentrace léčiva levetiracetamu v séru je klíčová pro terapeutické monitorování a klinický výzkum. Tradiční LC/MS/MS metody poskytují vysokou citlivost a specifitu, avšak jejich časová náročnost omezuje průtok vzorků.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem aplikace bylo ověřit výkonnost ultrarychlého systému Agilent RapidFire High-throughput MS/MS pro měření levetiracetamu v lidském séru. Studie porovnává jeho přesnost, preciznost, linearitu a citlivost s konvenční LC/MS/MS metodou.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky lidského séra s interním standardem (levetiracetam-D3) byly precipitovány acetonitrilem, centrifugovány a převáděny do 96-well desek. Analytický systém zahrnoval Agilent RapidFire 360 spojený s 6460 Triple Quadrupole LC/MS. SPE karta C18 (G9203E) pracovala s pufry:

• Buffer A: voda/10 mM ammonium acetát/0,1 % kyseliny mravenčí, 1,5 mL/min
• Buffer B: methanol/0,1 % kyseliny mravenčí, 1,25 mL/min

Objem injekce byl 10 µL. Přechody iontů Q1 → Q3 sledovaly kvantifikátor m/z 171,01/126,1 a kvalifikátor 171,01/69,1. Analýza jednoho vzorku trvala 9,5 s.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala intradenní i interdní přesnosti a přesnosti v rámci 15 % a koeficienty variace pod 10 % pro koncentrace 1–100 µg/mL. Lineárnost byla výborná (R2 > 0,995). Nánoš (< 1 %) a poměr signál/šum (> 20:1 při 1 µg/mL) byly minimální. Porovnání s LC/MS/MS na Mayo Clinic potvrdilo korelaci R2 > 0,99 a shodu v rozsahu 1,0 ± 0,1. Analýza zaslepených lidských vzorků vykázala R2 > 0,995.

Přínosy a praktické využití metody

Systém RapidFire/MS umožňuje až desetkrát rychlejší zpracování vzorků při zachování analytických parametrů LC/MS/MS. Je vhodný pro vysokoprůtokové klinické laboratoře a výzkumné projekty vyžadující rychlý monitoring koncentrací léčiv.

Budoucí trendy a možnosti využití

Ultrarychlé SPE/MS/MS by mohlo nalézt uplatnění v rozšířených panelech malých molekul, farmakokinetických studiích či v on-line monitorování pacientů. Dalším krokem je integrace do plně automatizovaných workflow s minimalizací manuálních úkonů.

Závěr

Agilent RapidFire High-throughput MS/MS prokázal schopnost rychle, přesně a citlivě měřit levetiracetam v séru. Při zachování výkonu LC/MS/MS zkrátil dobu analýzy na necelých 10 s na vzorek, což umožňuje výrazně vyšší průtok vzorků v klinické praxi.

Reference

1. Romm MV, Miller VP. High-Throughput Analysis of Levetiracetam in Serum Using Ultrafast SPE/MS/MS. Poster #161, 59th ASMS Conference on Mass Spectrometry and Allied Topics, June 7, 2011, Denver, CO.