What can PREMIER do for your glycan analysis?

Význam tématu

Analýza glykosidů a glykoproteinů je klíčová pro pochopení biologických procesů, vývoj bioterapeutik a kontrolu kvality v biofarmaceutickém průmyslu. Vysoce citlivé, reprodukovatelné a opakovatelné chromatografické metody umožňují přesné stanovení komplexních glykánových struktur a jejich modifikací, což má dopad na bezpečnost a účinnost léčiv.

Cíle a přehled studie / článku

Tento dokument představuje novou generaci HILIC kolonek ACQUITY PREMIER Glycan BEH Amide od společnosti Waters, která je navržena pro zvýšení recovery, citlivosti a opakovatelnosti analýz glykánů. Cílem je porovnat výkon konvenčních BEH amide kolonek a PREMIER kolonek před a po pasivaci povrchu fetuinem a demonstrovat přínos nové technologie v praxi.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika:

• Chromatografická separace glykánů pomocí HILIC na kolonkách 1,7 µm BEH Amide.
• Pasivace povrchu kolonek fetuinem k minimalizaci nespecifických interakcí povrch/analyte.
• Test výkonu s RapiFluor-MS Glycan Performance Test Standard.
• Detekce fluorescenčním a hmotnostním spektrometrickým systémem (RapiFluor-MS).

Instrumentace:

• Waters ACQUITY UPLC systém s RapiFluor-MS detekcí.
• ACQUITY PREMIER Glycan BEH Amide Column, 130 Å, 1,7 µm (50×2,1 mm, 100×2,1 mm, 150×2,1 mm).
• ACQUITY PREMIER Glycoprotein BEH Amide Column, 300 Å, 1,7 µm (50×2,1 mm, 100×2,1 mm, 150×2,1 mm).
• GlycoWorks Phosphoglycan SPE reagents HILIC pro přípravu vzorků.

Hlavní výsledky a diskuse

1. Recovery a citlivost: PREMIER kolony vykázaly výrazně vyšší recovery glykánů (např. M7-1P) ve srovnání s konvenčními kolonkami, a to již od první injekce.
2. Opakovatelnost: Pro 6 hlavních špiček byla u běžných kolonek RSD retenční doby v rozmezí 1,1–2,0 %, zatímco u PREMIER kolonek pouze 0,1–0,2 %, což potvrzuje značné zlepšení přesnosti.
3. Stabilita výkonu: Chromatogramy čtvrté injekce před a po pasivaci ukázaly, že PREMIER kolony udržují konzistentní rozlišení i při vysokém zatížení a opakovaných analýzách.
4. Minimalizace nespecifických interakcí: Pasivovaný povrch fetuinem redukuje ztráty vzorku a zlepšuje linearitu kalibrace pro vysoce sialylované struktury.

Přínosy a praktické využití metody

• Zvýšená citlivost a recovery glykánů při minimálních vzorkových objemech.
• Vysoká reprodukovatelnost retence i u komplexních, silně sialylovaných glykánů.
• Rychlý náběh k maximálnímu výkonu již od první injekce.
• Jednoduchá integrace do stávajících UPLC-MS workflow díky kompatibilitě s RapiFluor-MS.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Další optimalizace povrchových technologií pro rozsáhlejší pasivaci a širší spektrum analyzovaných biomolekul.
• Rozšíření aplikací na glykopeptidy a komplexní glykoproteiny v kontextu klinických studií a QC.
• Integrace automatizované přípravy vzorků s online SPE za účelem zvýšení throughputu.
• Využití pokročilých datových analýz a strojového učení pro interpretaci glykánových profilů.

Závěr

Waters ACQUITY PREMIER Glycan BEH Amide kolony představují významný posun ve výkonnosti HILIC separací glykánů díky inovativní pasivaci povrchu a optimalizovaným částicím. Metoda přináší vyšší citlivost, opakovatelnost a stabilitu potřebnou pro náročné biofarmaceutické aplikace.

Reference

• Waters Corporation. ACQUITY PREMIER Glycan BEH Amide Column Application Note, April 2021.