A Novel Approach in HPLC Chiral Method Development: Dealing with Multiple Chiral Centers

Význam tématu

Rozvoj robustních metod HPLC pro rozlišení enantiomerů a diastereomerů je zásadní v moderní farmaceutické analýze. Molekuly s více chirálními centry vykazují exponenciálně složitější chromatografické chování. Spolehlivé oddělení všech stereoisomerů je klíčové pro přesné kvantitativní stanovení nežádoucích izomerů a zajištění kvality léčiv.

Cíle a přehled studie

Studie představuje systematický postup kombinující chiralní a achiralní chromatografii v sérii. Cílem bylo vyvinout metodu schopnou plného rozlišení osmi stereoisomerů látky s třemi chirálními centry bez nutnosti derivatizace mobilní fáze. Postup zahrnoval frontální screening několika stacionárních fází a chromatografických režimů.

Použitá metodika a instrumentace

• Chiralní fáze: CHIROBIOTIC V2, T, TAG a CYCLOBOND I 2000 (DMP, HP-RSP, Native βCD)
• Achiralní fáze: Ascentis Phenyl, C18, RP-Amide a Discovery HS F5
• Chromatograf: Agilent 1100
• Režimy mobilní fáze: reverzní fáze (RP), polar-organická (POM), polar-ionická (PIM)
• Pufry: 20 mM acetát amonný pH 4,0
• Organické složky: methanol, acetonitril
• Detekce UV: 287 nm, teplota 25 °C, průtok 1 ml/min

Hlavní výsledky a diskuse

Screening potvrdil nejlepší enantiomerní selektivitu na CHIROBIOTIC V2 v RP i PI režimu. Separace všech osmi stereoisomerů na samotném V2 v RP režimu vedla k seskupení špiček bez rozlišení diastereomerů. Achiralní fáze Ascentis Phenyl oddělila čtyři diastereomerní skupiny v reverzním režimu. Kombinace CHIROBIOTIC V2 (10 cm) s Ascentis Phenyl (25 cm) v sérii v RP režimu zajistila úplné rozlišení osmi stereoisomerů za méně než jednu hodinu. Přidání hlavního analyzovaného izomeru potvrdilo jeho pozdní eluci ve směsi.

Přínosy a praktické využití metody

• Současné rozlišení enantiomerů i diastereomerů bez chemické úpravy vzorku
• Zrychlení QA QC procesů ve farmaceutických laboratořích
• Flexibilita díky kompatibilitě chiralních fází CHIROBIOTIC s klasickými reverzními podmínkami

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření sériové kombinace chiralních a achiralních kolon pro analýzu složitějších molekul s vyšším počtem chirálních center. Automatizovaný screening a optimalizace mobilních fází může zvýšit efektivitu vývoje metod. Vysokorychlostní a mikroproudové HPLC systémy nabídnou rychlejší analýzu s nižší spotřebou rozpouštědel.

Závěr

Návrh kombinované chromatografie otevírá nové možnosti v separaci komplexních stereoisomerů. Metoda je reprodukovatelná, efektivní a vhodná pro QA QC i výzkumné aplikace v analytické chemii.

Reference

• Bell DS Fridstrom A Parmar G A Novel Approach in HPLC Chiral Method Development Dealing with Multiple Chiral Centers Sigma Aldrich 2013 Application Note