A Simple Cleanup Protocol Using a Novel SPE Device for UPLC-MS/MS Analysis of Multi-Residue Veterinary Drugs in Milk

Význam tématu

Analýza reziduí veterinárních léčiv v mléce je klíčová pro zabezpečení potravinové bezpečnosti a ochranu spotřebitelů před alergickými reakcemi a rozvojem mikrobiální rezistence. Multi-reziduální přístup umožňuje současné sledování širokého spektra látek, čímž se zvyšuje efektivita a spolehlivost kontrol v potravinářských laboratořích.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo vyvinout rychlou a reprodukovatelnou metodu pro současnou extrakci, čištění a UPLC-MS/MS stanovení 72 veterinárních léčiv z devíti tříd (sulfonamidy, fluoroquinolony, β-agonisté, makrolidy, glukokortikoidy, amfenikoly, β-laktamy, cefalosporiny, tetracykliny) v mléce. Klíčovým prvkem byla aplikace nového SPE zařízení Oasis PRiME HLB ke kompletnímu odstranění tuků a fosfolipidů.

Použitá metodika a instrumentace

Pro odběr 1 mL mléka byl použit poměr 4:1 ml mléka vůči 0,2 % formiátu v acetonitrilu pro efektivní vysrážení proteinů. Po odstředění se supernatant upravil průtokem přes Oasis PRiME HLB cartridge, odpařil a rekonstituoval v 5 % metanolu.

• UPLC systém: ACQUITY UPLC I-Class s kolonkou BEH C18 1,7 µm, 2,1×100 mm, režim gradientu (2–99 % B).
• MS/MS: Xevo TQ-S, ESI+ a ESI–, optimalizované MRM přechody pro 72 analytů.
• Software: MassLynx v4.1 s databází Quanpedia pro rychlé získání metodických parametrů.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla průměrných procentuálních návratností 50–130 % se střední relativní odchylkou RSD <20 % (n=5) ve všech třech testovaných koncentracích (0,1–10 µg/mL). Optimalizace poměru organického rozpouštědla a obsahu formiové kyseliny vedla k lepšímu srážení proteinů a současně minimalizaci ztráty bazických látek. SPE čištění účinně eliminovalo
matriciální interferenci fosfolipidů a tuků, což prodloužilo životnost kolony i přístroje.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda je jednoduchá, rychlá a vhodná pro rutinní analýzu velkého počtu vzorků mléka. Kombinace proteinové precipitace a pass-through SPE výrazně snižuje čas a náročnost údržby UPLC-MS/MS aparatury. Využití databáze Quanpedia zkracuje vývoj metody a minimalizuje chyby.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další automatizace SPE kroků pomocí 96-well formátů, rozšíření metody na další potravinové matice (maso, vejce) a integrace vysokorychlostních UPLC kolonek. Vývoj nových sorbentů a zlepšení databází metod posílí univerzálnost a robustnost multi-reziduálních postupů.

Závěr

Navržený protokol využívající Oasis PRiME HLB a UPLC-MS/MS umožňuje spolehlivou stanovení širokého spektra veterinárních léčiv v mléce s vynikajícím poměrem rychlosti, přesnosti a jednoduchosti obsluhy. Metoda splňuje požadavky rutinních laboratoří na efektivitu i ekonomičnost.

Reference

DeFeng Huang, Kim Van Tran, Michael S. Young (2015) A Simple Cleanup Protocol Using a Novel SPE Device for UPLC-MS/MS Analysis of Multi-Residue Veterinary Drugs in Milk, Waters Application Note 720005414EN