SIMULTANEOUS ANALYSIS OF VITAMIN A AND D3 IN VITAMIN PREMIXES AND CONCENTRATES BY ULTRA-PERFORMANCE CONVERGENCE CHROMATOGRAPHY/PDA

Význam tématu

Analýza vitamínů rozpustných v tucích, zejména vitamínu A a D3, je v potravinářské a farmaceutické praxi klíčová pro zajištění kvality a přesnosti dávkování doplňků. Tradiční HPLC metody vyžadují separátní extrakci a úpravu vzorku kvůli odlišným koncentracím a absorpčním vlastnostem obou vitamínů. To vede k dlouhým analytickým časům, vyšší spotřebě organických rozpouštědel a složitému workflow.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a validovat rychlou, spolehlivou metodu pro simultánní stanovení vitamínu A (retinylacetát/retinol) a D3 (cholekalciferol) ve vitaminových premixech a koncentrátech pomocí UltraPerformance Convergence Chromatography s detekcí PDA. Metoda má umožnit přímou analýzu bez předchozí chromatografické očisty a minimální spotřebu organických rozpouštědel.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky byly saponifikovány ethanolem se zásaditou vodnou fází a antioxidantem, extrahovány směsí hexanu a diethyléteru, promyty vodou a filtrátem 0,2 µm upraveny do konečného objemu n-hexanu. Analýza probíhala na systému ACQUITY UPC2 s detektorem PDA a softwarem Empower 3. Kolona BEH 3,0×100 mm, 1,7 µm, mobilní fáze: superkritické CO2 (A) a isopropanol (B), gradient 0,5–20 % B během 9,9 min, teplota 55 °C, tlak 2 000 psi, průtok 1,7 mL/min, detekce při 260 nm.

Hlavní výsledky a diskuse

Lineární kalibrace pro vitamín A i D3 prokázala vynikající koeficienty determinace (R2 ≥ 0,9998). Použití vitamínu D2 jako interního standardu pro D3 přineslo mezilaboratorní přesnost pod 6 % a retence byla reprodukovatelná i při ±2 % změnách průtoku, tlaku či teploty. Rozlišení kritické dvojice D2/D3 dosahovalo minima R ≥ 1,6, což výrazně převyšuje požadavek R ≥ 1,2. Chromatogramy ukázaly stoprocentní separaci vitamínů od matricových příměsí a možnost přímé injekce extractu bez dodatečné výměny rozpouštědla.

Přínosy a praktické využití metody

• Výrazné zkrácení doby analýzy oproti konvenčním HPLC postupům.
• Snížená spotřeba organických rozpouštědel – 0,12 mL isopropanolu na test.
• Eliminace složité předúpravy vzorku a minimalizace expozice pracovníků.
• Vysoká selektivita, linearita a reprodukovatelnost vhodné pro QA/QC a průmyslovou analytiku.

Budoucí trendy a možnosti využití

Metodu lze rozšířit na simultánní stanovení dalších vitamínů rozpustných v tucích či antioxidantů. Očekává se další snížení spotřeby CO2 a organických modifierů, integrace s online extrakcí vzorků a automatizace přípravy. Vhodná je také kombinace s hmotnostní spektrometrií pro zvýšení selektivity a nižší detekční limity.

Závěr

Vyvinutá UPC2/PDA metoda umožňuje rychlou, přesnou a ekonomickou simultánní analýzu vitamínů A a D3 v premixech a koncentrátech bez nutnosti složité chromatografické očisty. Metoda splňuje požadavky SMPR norem a představuje udržitelnou alternativu k tradiční HPLC.

Reference

1. Aubin A Analysis of fat soluble vitamin capsules using UltraPerformance Convergence Chromatography UPC2 Waters Application Note No. 720004394EN 2012
2. Standard Method Performance Requirements for vitamin A in pre-blends pre-mixes and pure materials AOAC SMPR 2012.003
3. Standard method performance requirements for vitamin D3 in pre-blends pre-mixes and pure materials AOAC SMPR 2012.004