Method Transfer from an Agilent 1100 Series Quaternary LC to an Agilent 1260 Infinity II LC

Význam tématu

Metoda přenosu analytických metod mezi různými kapalinovými chromatografy je v praxi klíčová pro zajištění konzistence výsledků a splnění regulovaných požadavků v oblastech farmacie, potravinářství a QA/QC laboratořích. Díky ověřené ekvivalenci mezi staršími a moderními systémy lze minimalizovat validaci nových metod a optimalizovat analytický postup.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem Technical Overview je ukázat postup přenosu metody separace osmi polyfenolů z Agilent 1100 Series Quaternary LC na Agilent 1260 Infinity II LC. Studie hodnotí parametry rozlišení, retenční časy, přesnost plochy a případné posuny mezi systémy. Navíc byla metoda upravena pro UHPLC podmínky za účelem zkrácení analýzy a snížení spotřeby rozpouštědel.

Použitá metodika

Vzorek obsahoval osm polyfenolů (kyselina gallová, katechin, kyselina kávová, epikatechin, epigalokatechin galát, p-kumarová kyselina, kyselina ferulová a naringin) o koncentraci 100 ng/µL v methanol:voda (1:1) a dále naředěný mobilní fází.

Chromatografické podmínky HPLC:

• Kolona ZORBAX SB-C18, 4,6×150 mm, 5 µm
• Mobilní fáze A: 0,1 % kyselina mravenčí ve vodě, B: 0,1 % kyselina mravenčí v acetonitrilu
• Průtok 1,5 mL/min, gradient 0–1 min 10 %B, 1–12 min 10→30 %B, 12–13 min 30→95 %B, stop time 15 min, post time 10 min
• Objem injekce 5 µL, teplota kolony 30 °C
• Detekce 280 nm, datová frekvence 10 Hz

Chromatografické podmínky UHPLC:

• Kolona InfinityLab Poroshell 120 SB-C18, 2,1×150 mm, 2,7 µm
• Mobilní fáze shodná s HPLC
• Průtok 0,6 mL/min, gradient 0–0,42 min 10 %B, 0,42–5,00 min 10→30 %B, 5,00–5,42 min 30→95 %B, stop time 7 min, post time 5 min
• Objem injekce 1 µL, teplota kolony 30 °C
• Detekce 280 nm, datová frekvence 80 Hz

Použitá instrumentace

Agilent 1100 Series Quaternary LC:

• Quaternary Pump G1311A
• Degasser G1379A
• Autosampler G1313A
• Thermostatted Column Compartment G1316A
• Diode Array Detector G1315B (10 mm flow cell)

Agilent 1260 Infinity II LC:

• Quaternary Pump G7111B
• Vialsampler G7129A s integrovanou ICC kolonnou (6 µL heat exchanger – Option #66, sample cooler – Option #100)
• Variabilní Wavelength Detector G7114A (10 mm flow cell)
• ICC s 3 µL heat exchanger (Option #063)
• Software Agilent OpenLAB CDS verze 2.1

Hlavní výsledky a diskuse

Přenos metody prokázal ekvivalentní výkon obou systémů:

• Retenční časy dosahovaly RSD < 0,14 % na 1100 LC a < 0,11 % na 1260 LC
• Plochy píků měly RSD < 0,10 % (1100 LC) a < 0,12 % (1260 LC)
• Všechny sloučeniny byly separovány na dno báze
• Absolutní posuny RT mezi systémy ≤ ±0,02 min (≤ ±1,2 %), mezi výměnnými ICC ≤ ±0,03 min (≤ ±0,7 %)
• UHPLC verze zkrátila dobu analýzy o 52 % a snížila spotřebu rozpouštědel o 80,8 %, při zachování vysoké přesnosti (RT RSD < 0,07 %, plocha RSD < 0,23 %)

Přínosy a praktické využití metody

Výsledná metoda umožňuje:

• rychlý přechod mezi staršími a novými LC platformami
• úsporu času a nákladů díky vyšší rychlosti a snížené spotřebě rozpouštědel
• snížení validačních požadavků
• zvýšení reproducibility a robustnosti rutinních rozborů polyfenolů

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj se očekává v oblastech:

• pokročilá UHPLC a ultra-rychlé metody
• automatizace a online integrace s hmotnostní spektrometrií
• vylepšené software pro emulaci a validaci metod (např. ISET)
• udržitelná analytika se sníženou spotřebou rozpouštědel

Závěr

Studie potvrdila, že přenos metody z Agilent 1100 Series Quaternary LC na Agilent 1260 Infinity II LC proběhl bez ztráty kvality separace, přesnosti a robustnosti. Díky možnosti nasazení různých integrovaných kolonnových komor a přechodu na UHPLC se otevřely nové možnosti pro rychlejší a úspornější analýzy.

Reference

• Krieger S. Method Transfer from an Agilent 1100 Series Quaternary LC to an Agilent 1260 Infinity II LC: Proof of Equivalency for the Analysis of Antihistaminic Drugs. Agilent Technologies Technical Overview; 5991-6914EN, 2016.
• Agilent Technologies. Agilent 1290 Infinity with ISET. User Manual; G4220-90314, 2015.