Analysis of Tricyclic Antidepressants using Agilent Poroshell HPH C18

Význam tématu

Tricyklická antidepresiva (TCA) představují jednu z nejstarších skupin farmak používaných k léčbě deprese. Navzdory nástupu novějších látek s menším výskytem nežádoucích účinků zůstávají TCA důležitou volbou pro část pacientů díky své ověřené účinnosti. Chemicky jsou charakterizována třemi kondenzovanými aromatickými kruhy a aminovou skupinou se pKa v rozmezí 8–10. V analytické praxi je klíčové zajistit kvalitní separaci těchto bazických sloučenin bez výrazného zauhlování píků, což vyžaduje odolné a selektivní chromatografické kolony optimalizované pro střední až vysoké pH.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo porovnat výkon povrchově pórovitých Agilent Poroshell HPH C18 kolon se srovnatelnými výrobky konkurenčního dodavatele při separaci standardní směsi TCA na mobilní fázi pH 7.0. Hodnoceny byly hlavně parametry píků (tailing faktor), účinnost (počet teor. destiček) a provozní tlaky ve formátu 3 × 100 mm.

Použitá metodika a instrumentace

Pro analýzu byla použita sestava Agilent 1260 Infinity LC zahrnující:

• Binary Pump SL (G1312B),
• Termostatovaná komora (G1316C),
• Autosampler SL Plus (G1376C),
• Diodový array detektor DAD (G4212A) s 10 mm kyvetou.

Kolony: Agilent Poroshell HPH C18 3×100 mm, 2.7 µm a 4 µm; konkurenční kolony 3×100 mm, 2.6 µm a 5 µm. Mobilní fáze: 60 % acetonitril / 40 % 20 mM fosfátového pufru (pH 7), průtok 1 mL/min, teplota 25 °C, detekce při 254 nm. Vzorky obsahovaly uracil, doxepin HCl, nortriptylin HCl, amitriptylin HCl a trimipramin maleát, připravené ve vodě.

Hlavní výsledky a diskuse

Agilent Poroshell HPH C18 kolony prokázaly u směsi TCA výrazně lepší tvar píků (tailing faktory 1,05–1,96 na 2.7 µm a 1,25–1,68 na 4 µm) a vysokou účinnost až 15 679 teor. destiček pro trimipramin na 2.7 µm kolóně. Provozní tlak nepřekročil 280 bar, což je kompatibilní i s běžnými LC systémy určenými pro 400 bar. Konkurenční superficially porous kolony vykázaly vyšší tailingové faktory (1,29–3,22) a nižší účinnost (2 522–13 657), zejména u bazických sloučenin. Výsledky potvrzují, že optimalizovaná povrchová úprava Poroshell HPH C18 minimalizuje interakce se zbytkovými silanoly a zajišťuje opakovatelné a ostré píky i při neutrálním či mírně zásaditém pH.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rychlou a citlivou separaci tricyklických aminných farmak bez potřeby extrémně nízkého pH, čímž šetří čas na úpravu mobilní fáze a zvyšuje životnost kolony. Formát 3×100 mm s povrchově pórovitou částicí spotřebuje méně rozpouštědla, což snižuje provozní náklady a usnadňuje integraci s hmotnostní spektrometrií. Výsledky jsou vhodné pro QA/QC laboratoře v farmaceutickém průmyslu i pro výzkumné aplikace.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšiřování HPH C18 materiálů pro práci v širokém rozsahu pH, včetně aplikací s borátovými a amoniakálními pufry. Kombinace s UHPLC a MS detekcí umožní zkrácení doby analýzy a zvýšení citlivosti u stopových a metabolitických studií. Rozvoj automatizovaných metod pro screening bazických léků a jejich metabolit bude podporovat farmakovigilanční programy a vývoj nových léčiv.

Závěr

Agilent Poroshell HPH C18 kolony se prokázaly jako robustní a vysoce efektivní nástroj pro analýzu tricyklických antidepresiv při neutrálním až mírně zásaditém pH. Výborné tvarování píků, vysoká účinnost a provozní stabilita dávají laboratořím jistotu při rutinních i výzkumných aplikacích.

Reference

1. Jing L.L., Jiang R. et al. Selectivity differences between alkyl and polar modified alkyl phases in reversed phase HPLC. J. Sep. Sci. 2009, 32, 212–220.
2. Kirkland J.J., Henderson J.W. et al. Stability of silica-based, endcapped columns with pH 7 and 11 mobile phases for RP-HPLC. J. Chromatogr. A 1997, 762, 97–112.
3. Claessens H., van Straten M.A., Kirkland J.J. Effect of buffers on silica-based column stability in RP-HPLC. J. Chromatogr. A 1996, 728, 259–270.
4. Long W.J., Mack A.E., Wang X., Barber W.E. Selectivity and Sensitivity Improvements for Ionizable Analytes Using High-pH-Stable Superficially Porous Particles. LCGC 2015, 33(4).
5. Long W.J. Automated Amino Acid Analysis using an Agilent Poroshell HPH C18 column. Agilent Application Note 5991-5571EN, 2015.
6. Fu R., Lei Q. Fast Analysis of Oxidative Hair Dyes at High pH with Poroshell HPH C18 and Other Phases. Agilent Application Note 5991-5263EN, 2014.
7. Mayo Clinic. Tricyclic antidepressants and tetracyclic antidepressants, 2005.
8. Wikipedia. Tricyclic antidepressant, 2016.
9. Doxepin. DrugBank DB01142, 2016.