Agilent AdvanceBio SEC Protein Standards

Význam tématu

Analýza velikosti a molekulové hmotnosti proteinů je klíčová v biotechnologii a biopharmaceutickém průmyslu. Kalibrace SEC kolón umožňuje přesné stanovení rozdělení proteinů podle velikosti. Standardy AdvanceBio SEC Protein Standards od Agilent poskytují široké spektrum referenčních molekul od 1 kDa do 670 kDa, což zaručuje spolehlivou verifikaci a kontrolu parametrů SEC separací.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem dokumentu je představit specifikaci a výhody pokročilých proteinových standardů pro AdvanceBio SEC kolony a představit související produktovou řadu Agilent SEC kolón. Zahrnuje přehled složení standardních směsí, separační výkon na 130Å a 300Å variantách a dostupné dimenze kolón.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda: kalibrační size exclusion chromatography (SEC) využívá princip velikostní exkluze k separaci molekul podle hydrodynamického objemu.

Standardní směsi obsahují:

• Pro 300Å: thyreoglobulin (670 kDa), γ-globulin (150 kDa), ovalbumin (45 kDa), myoglobin (17 kDa), angiotensin II (1 kDa)
• Pro 130Å: ovalbumin (45 kDa), myoglobin (17 kDa), aprotinin (6,7 kDa), neurotensin (1,7 kDa), angiotensin II (1 kDa)

Instrumentation:

• Agilent AdvanceBio SEC analytické kolony 130Å a 300Å, k dispozici v rozměrech 4,6×150/300 mm a 7,8×150/300 mm, částice 2,7 µm
• Agilent AdvanceBio SEC guard kolony 4,6×50 mm a 7,8×50 mm, částice 2,7 µm

Hlavní výsledky a diskuse

Separační výkon byl demonstrován na obou povrchových variacích kolón s retenčními časy v rozmezí 4–12 minut. Standardy pokrývají lineární oblast kalibrace pro různé molekulové hmotnosti. Obě kolony dosahují vysokého rozlišení píků a reprodukovatelných retencí mezi sériemi a různými laboratořemi.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá a přesná kalibrace SEC systémů v QA/QC i výzkumných laboratořích
• Široký rozsah molekulových hmotností umožňuje univerzální použití pro malé peptidy i velké proteiny
• Stabilní vlastnosti standardů zajišťují dlouhodobou spolehlivost výsledků

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace s UHPLC systémy pro zkrácení analýz a zvýšení propustnosti
• Vývoj monolitických a nanočásticových SEC kolón pro vyšší rozlišení
• Aplikace ve vysoce výkonné bioseparaci a charakterizaci nových bioterapeutik

Závěr

AdvanceBio SEC Protein Standards společně s dedikovanými SEC kolónami poskytují komplexní řešení pro kalibraci a validaci velikostně-exklužních analýz proteinů. Díky optimalizovaným parametrům, širokému rozsahu molekulových hmotností a robustnímu provedení jsou ideální volbou pro biopharmaceutické i výzkumné aplikace.

Reference

• Agilent Technologies. AdvanceBio SEC Protein Standards and Columns. Publikace č. 5991-6426EN, 2016