Agilent 1290 Infinity II LC with ISET – Emulation of Waters Alliance 2695 LC Through Waters Empower Software

Význam tématu

Transfer analytických metod mezi chromatografickými systémy je zásadní pro farmaceutický průmysl a regulačně náročná prostředí. Zajištění konzistence retenčních časů a rozlišení analytů při přechodu z konvenční HPLC na moderní UHPLC šetří čas i náklady na opakovanou validaci.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo ověřit schopnost emulace LC metody pro paracetamol a jeho nečistoty přenesené z Waters Alliance 2695 LC na Agilent 1290 Infinity II LC řízený softwarem Waters Empower. Porovnány byly retenční časy a hodnoty rozlišení bez aktivace ISET, s aktivovaným ISET a s dalším doladěním parametrů (fine-tuning).

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky obsahovaly paracetamol (5 mg/mL) a šest nečistot (každá 10 µg/mL) ve směsi LC grade vody a acetonitrilu s TFA. Chromatografické podmínky:

• Mobilní fáze A: 0,1 % TFA ve vodě; B: 0,09 % TFA v acetonitrilu
• Gradient: 0–0,5 min 5 % B; 0,5–8 min 5→70 % B; 8–8,5 min návrat na 5 % B; 8,5–16 min stabilizace
• Průtok: 1,2 mL/min; injekce 3 µL s proplachem jehly
• Teplota kolony: 30 °C; detekce UV 270 nm, 10 Hz sběr dat

Analýzy proběhly na následujících přístrojích:

• Waters Alliance 2695 LC s detektorem VWD 2487
• Agilent 1290 Infinity II LC (pumpa G7104A, multisampler G7167B, termostat G7116B, DAD G7117B)
• Software Waters Empower 3 (build 3471) s hotfix ICS 2.1 a Agilent Controller Framework A.02.03 DU1 HF2

Hlavní výsledky a diskuse

Bez ISET se retenční časy na Agilent 1290 Infinity II posunuly směrem k nižším hodnotám a rozlišení analytů výrazně vzrostlo. Po aktivaci ISET se retenční časy přiblížily referenčním datům z Waters Alliance 2695 LC s maximální odchylkou ±5 % (±0,3 min). Doladěním parametrů pod 100 µL doplňkového objemu zpoždění se dosáhlo odchylek <0,1 min (<2 %) u všech analytů. Hodnoty rozlišení zůstaly stabilní, ztráta rozlišení nepřekročila 5 %.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda s ISET přináší:

• Rychlý přechod mezi LC systémy bez úprav hardware či metody
• Minimální potřebu opakované validace
• Konzistentní data napříč přístroji
• Snížení nákladů na pracovní čas a spotřební materiál

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření ISET pro další výrobce UHPLC/HPLC systémů, propojení s LIMS a využití umělé inteligence pro automatické nastavení optimálních parametrů emulace. V praxi lze řešení aplikovat v procesní kontrole, vysokopropustném screeningu i výzkumu nových sloučenin.

Závěr

Agilent Intelligent System Emulation Technology umožňuje bezproblémový přenos validovaných LC metod mezi odlišnými chromatografickými systémy. Pro analýzu paracetamolu a jeho nečistot byla potvrzena vysoká přesnost i reprodukovatelnost výsledků na Agilent 1290 Infinity II LC při řízení softwarem Waters Empower.

Reference

1. Huesgen A. G. Agilent 1290 Infinity Binary LC with ISET – Emulation of the Waters Alliance 2695 LC system analyzing aromatic acids. Application Note 5991-2019EN, Agilent Technologies, 2013.
2. Agilent 1290 Infinity with ISET. User Manual G4220-90313, Agilent Technologies, 2014.
3. Huesgen A. G. Agilent 1290 Infinity Binary LC with ISET – Emulation of the Waters Alliance 2695 LC System Analyzing Analgesics. Application Note 5991-2792EN, Agilent Technologies, 2013.