Combining small-scale purification and analysis of monoclonal antibodies on one instrument

Význam tématu

Monoklonální protilátky představují klíčové biologické léčivo, jejichž efektivní purifikace a charakterizace je zásadní pro zajištění kvality a bezpečnosti. Integrované řešení spojení purifikace a analýzy na jednom přístroji usnadňuje workflow, šetří čas a vzorek.

Cíle a přehled studie / článku

Studie demonstruje použití Agilent 1260 Infinity Bio-inert Quaternary LC System pro malé objemy purifikace monoclonální protilátky anti-c-Myc z E. coli lyzátu s následnou analýzou kvality a kvantity na jediném přístroji.

Použitá metodika a instrumentace

• Agilent 1260 Infinity Bio-inert Quaternary LC System (pumpa G5611A, autosampler G5667A, chromatografická komora G1316C, DAD G1315D, frakční sběrač G5664A, manuální injektor G5628A).
• Kolony: HiTrap Protein A (1 mL), Superdex 200 SEC (10 × 300 mm), Agilent Protein A Monolith (4.6 × 250 mm), Bio MAb IEX (4.6 × 250 mm).
• Buffery: PBS, glycin-HCl, MES/NaCl; vzorek: anti-c-Myc protilátka v 5 mL E. coli lyzátu.

Hlavní výsledky a diskuse

Dvoustupňová purifikace začala zachycením mAb na Protein A kolonu při 5 mL injekci, následně byl použit SEC pro odstranění nespecifických proteinů. Nízké provozní tlaky (< 10 bar) umožnily vysoké objemy vzorku. Identifikace a kvantifikace pomocí Protein A monolitu ukázala linearitu 0,078–20 µg (R2 = 0,99874) a výslednou koncentraci 0,94 mg/mL. Analýza nábojových variant IEX gradientem při pH 6,4 odhalila drobné kyselé i zásadité varianty, potvrzující čistotu a integritu protilátky.

Přínosy a praktické využití metody

Kompletní proces na jednom přístroji minimalizuje mezistupňové manipulace, zkracuje dobu analýzy a snižuje riziko kontaminace. Uplatnění nachází v QA/QC a vývojových laboratořích biotechnologických firem.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj směřuje k plně automatizovaným sekvencím purifikace a analýzy, novým monolitickým stacionárním fázím a online monitorování kvality protilátek v reálném čase.

Závěr

Agilent 1260 Infinity Bio-inert Quaternary LC nabízí efektivní řešení pro malé objemy purifikace a komplexní analýzu monoklonálních protilátek, čímž zvyšuje produktivitu a spolehlivost laboratorních procesů.

Reference

1. D. Low et al. Future of antibody purification, Journal of Chromatography B 848:48–63, 2007.
2. Protein Purification Handbook, GE Healthcare.