Analysis of FFPE treated clinical tissue sections obtained from Human Intraocular Malignancy, Uveal Melanoma by Mass Spectrometry Imaging (MSI)

Význam tématu

Metoda zobrazování molekul pomocí hmotnostní spektrometrie na FFPE řezech poskytuje přesnou prostorovou mapu distribuce biologicky relevantních látek bez nutnosti barvicích postupů. Uveální melanom jako hlavní intraokulární malignita vyžaduje detailní chemickou charakterizaci pro zlepšení diagnostiky a prognostického posouzení.

Cíle a přehled studie

Studie si kladla za cíl vyhodnotit využití MSI metod MALDI a DESI pro analýzu parafinem zalitých očních řezů od pacientů s uveálním melanomem. Zaměřila se na zobrazování molekulárních signálů v různých částech oka a na statistickou klasifikaci vzorků podle prognózy.

Použitá metodika a instrumentace

• Příprava vzorku: standardní fixace formalinem, parafinové zalití, řezy 5 µm
• MALDI MSI: nanesení matricového roztoku, ionizace laserem, rozlišení 100×100 µm a 50×50 µm v pozitivním režimu
• DESI MSI: přímá deprotonace molekul v negativním režimu, rozlišení 200×200 µm bez další úpravy
• Hmotnostní spektrometr: SYNAPT (Waters Corporation) ve Sheffieldu
• Datová analýza: PCA a PLS-DA v prostředí MATLAB s PLS Toolbox (Eigenvector)

Hlavní výsledky a diskuse

• Rozdílná lokalizace molekul v různých vrstvách oka: choroid, rohovka, retina, čočka a tumor
• Signály v rozsahu m/z 100–1000 ukázaly odlišné lipidové a metabolitické profily v tumoru vs. zdravé tkání
• PCA jasně oddělila vzorky podle prognózy
• PLS-DA zdůraznila diskriminační signály odpovídající sfingolipidům a lyso-fosfocholinu

Přínosy a praktické využití metody

Metoda MSI doplňuje klasickou histopatologii o chemickou dimenzi bez nutnosti barvicích či fluorescenčních markerů. Umožňuje lokalizaci biomarkerů, podporu prognózování a lze ji využít v translaci do klinické praxe.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Zvýšení prostorového rozlišení pod 10 µm a 3D zobrazování
• Integrace s multimodálními zobrazovacími technologiemi a umělou inteligencí pro pokročilou analýzu
• Rozšíření aplikací na další oční onemocnění a biobanky tkání
• Standardizace protokolů pro rutinní klinické nasazení a kontrolu kvality

Závěr

MSI na FFPE řezích očí prokázala schopnost rozlišit molekulární profily zdravé tkáně a uveálního melanomu s vysokou prostorovou přesností. Statistická analýza potvrdila třídění vzorků podle prognózy a identifikovala klíčové lipidové biomarkery.

Reference

V textu nebyly uvedeny žádné literární zdroje.