Transferring Methods for Monoclonal Antibody Analysis from an Agilent 1260 Infinity Quaternary LC System to an ACQUITY Arc System

Význam tématu

Analýza monoklonálních protilátek hraje klíčovou roli v biotechnologickém a farmaceutickém průmyslu, zejména pro kontrolu čistoty, stability a biologické aktivity přípravků. Přenos metod mezi různými chromatografickými platformami zajišťuje konzistentní kvalitu dat napříč laboratořemi a minimalizuje potřebu rozsáhlé revalidace, čímž se šetří čas a náklady.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem aplikace bylo ukázat rovnoměrný přenos isokratické metody velikostní exkluze (SEC) a gradientní metody peptidového mapování z platformy Agilent 1260 Infinity Quaternary LC System na systém ACQUITY Arc. Studie porovnává retence, plošné procento, opakovatelnost a chromatografické parametry obou přístrojů.

Použitá metodika a instrumentace

Pro SEC analýzu:

• Systémy: Agilent 1260 Infinity Quaternary LC System s HiP ALS a DAD, ACQUITY Arc System s 2489 UV/Vis detektorem (Path 1)
• Kolona: Tosoh TSKgel G3000SWxl, 250 Å, 5 µm, 7,8×300 mm
• Mobilní fáze: 0,2 M fosfátový pufr, 0,25 M chlorid draselný, pH 6,2; průtok 0,5 mL/min
• Detekce: 280 nm, teplota vzorku 5 °C, objem injekce 20 µL

Pro peptidové mapování:

• Systémy: Agilent 1260 Infinity Quaternary LC System, ACQUITY Arc System s aktivním předehřevem CH-30A
• Enzymatická štěpení: trypsin, konečná koncentrace vzorku 0,5 mg/mL
• Kolona: XSelect CSH C18, 130 Å, 3,5 µm, 3×100 mm
• Mobilní fáze A: voda s 0,1 % FA; B: acetonitril s 0,1 % FA; teplota kolony 60 °C, průtok 0,3 mL/min, injekce 10 µL
• Detekce: 215 nm, sampling rate 20 Hz
• Řízení gradientu: Gradient SmartStart k vyrovnání objemu v dead volume

Hlavní výsledky a diskuse

V SEC přenosu byly zjištěny téměř identické retence polymeru, dimeru, monomeru a nízkomolekulárních druhů s rozdíly retence do 0,16 min a plošné procento rozdílu maximálně 0,07 %. RSD retence i plošného procenta pro pět opakování na obou systémech činilo méně než 2 %, splňovalo tedy požadavky USP <621>.
Peptidové mapování prokázalo shodné relativní retenční časy pro 20 vybraných peptidů s rozdíly v RRT do 0,035. Použití Gradient SmartStart zajistilo, že offset gradientu mezi systémy byl kompenzován bez úprav metodických parametrů.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlé a přímé přenesení metod mezi HPLC a UHPLC platformami
• Minimalizace opětovné validace a zajištění souladu výsledků
• Univerzální řešení pro in-house i externí smluvní laboratoře

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj multi-flow path technologií umožní širší přizpůsobení se různým chromatografickým konfiguracím. Integrace s pokročilými datovými platformami a automatizovanými pracovními postupy podpoří efektivitu kvalitativních a kvantitativních analýz v biologické výrobě.

Závěr

Byla prokázána ekvivalence metod SEC a peptidového mapování při přenosu z Agilent 1260 na ACQUITY Arc bez nutnosti úprav podmínek. ACQUITY Arc System s Gradient SmartStart technologie usnadňuje emulaci chromatografických metod a zkracuje dobu potřebnou k jejich nasazení v různých laboratořích.

Reference

1. U.S. Pharmacopeial Convention. General Chapter <129> Analytical Procedures for Recombinant Therapeutic Monoclonal Antibodies. USP39-NF34. Official from May 1, 2016.
2. U.S. Pharmacopeial Convention. General Chapter <621> Chromatography. USP38-NF33. Official from August 1, 2015.
3. Waters Corporation. ACQUITY Arc System Brochure. 2015; 720005393en.