ProteinWorks - TAKE THE COMPLEXITY OUT OF LARGE MOLECULE QUANTIFICATION

Význam tématu

Analýza velkých biomolekul, zejména protilátek, je klíčová v preklinickém výzkumu i vývoji léčiv. Přesné a citlivé stanovení proteinů v biologických matricích (plazma, sérum) podporuje rozhodování ve farmaceutické vývojové fázi a zajišťuje kvalitu a porovnatelnost výsledků mezi laboratořemi.

Cíle a přehled článku

Článek popisuje komplexní řešení ProteinWorks™ pro přípravu vzorků a LC-MS kvantifikaci proteinů pomocí surrogate peptidového přístupu. Hlavním cílem je demonstrovat standardizovanou, reprodukovatelnou a flexibilní metodu s vysokou citlivostí pro sledování monoklonálních protilátek v plazmě.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda kombinuje předem odvážené reagencie a standardizované protokoly: eXpress Digest kity pro rychlý enzymatický rozklad, µElution SPE pro očistu peptidů a Intact mAb Check jako kontrolní standard. Čištění následuje SPE krok, po kterém se analyzují signature peptidy na LC-MS platformě.
Klíčová instrumentace:

• ACQUITY UPLC s kolonkou Peptide BEH C18 (300 Å, 1,7 µm, 2,1×150 mm)
• Pozitivně tlakový 96-kanálový procesor a vakuová SPE vakuová destička
• Modulární termoblok pro 1 mL zkumavky
• 96-well destičky a uzávěry pro vzorky

Hlavní výsledky a diskuse

Reprodukovatelnost intra- i inter-kit pro monoklonální protilátky (bevaci­zumab, infliximab, trastuzumab, adalimumab) dosahuje jedno­místných %CV.
Metoda dokáže kvantifikovat infliximab až do 10 ng/mL v plazmě potkana s vysokým poměrem signál/šum. Standardní křivky ve frekvencích vzorků 15, 35 a 70 µL vykazují lineární oblast (r2 ≥ 0,994) a přesnost okolo 100 %.

Přínosy a praktické využití metody

ProteinWorks soupravy snižují zdroj variability díky předem odměřeným reagenciím a jasným postupům. Laboratoře tak mohou rychle přenášet metodu mezi analytiky, pobočkami i CRO. Metoda je vhodná pro výzkum, vývoj biologik a regulované laboratoře zaměřené na QA/QC.

Budoucí trendy a možnosti využití

Můžete očekávat další rozšíření na multiplexní analýzy, automatizaci na robotických platformách a integraci s datovými platformami pro vysokoprůtokové bioanalytické workflow. Další oblastí rozvoje bude rozšiřování repertoáru surrogate peptidů a validace pro nové biologické látky.

Závěr

ProteinWorks představuje robustní řešení pro kvantifikaci velkých molekul, které kombinuje citlivost, reprodukovatelnost a flexibilitu. Standardizované sady kitů a předpřipravené protokoly umožňují rychlý přenos metod a spolehlivé výsledky v různých prostředích.

Reference

TECHNOLOGY BRIEF 720005570EN
APPLICATION NOTE 720005535EN
TECHNOLOGY BRIEF 720005575EN