INTER-LABORATORY REPRODUCIBILITY OF A TARGETED LIPIDOMICS PLATFORM FOR ANALYSIS OF HUMAN SERUM AND PLASMA

Význam tématu

Analýza plasmatických lipidů je klíčová pro pochopení homeostázy a metabolických změn spojených s nemocemi. Díky rychlému vývoji hmotnostní spektrometrie a zjednodušeným postupům lipidomiky roste potenciál klinických a biomedicínských aplikací. Pro srovnávání dat napříč laboratořemi je však nutné zavést standardizované protokoly, kvantifikaci v mólových jednotkách a jednotné kontrolní parametry kvality.

Cíle a přehled studie

Studie se zaměřila na ověření opakovatelnosti a reprodukovatelnosti cílené lipidomické metody LipidQuan mezi různými laboratořemi. Cílem bylo porovnat výsledky z několika míst pomocí jednotných testovacích sad obsahujících kalibrační křivky, QC extrakty a NIST SRM 1950 referenční plasmu.

Použitá metodika a instrumentace

Metodu tvoří rychlá chromatografie s osmime­notní gradientní elucí a následná hmotnostně spektrometrická detekce v režimu polarity switchingu. Celkem bylo sledováno 431 tranzicí v pozitivním režimu a 446 tranzicí v negativním režimu. Validace zahrnovala hodnocení linearity, intra- a interdenní přesnosti a správnosti, rozsah kvantifikace (LLOQ–ULOQ), specifičnost, přenos vzorku a možné matriční interference.

Použitá instrumentace

• LC-MS/MS systém s tříštou rozpouštěčovou pumpou a API rozhraním od Waters
• Software TargetLynx pro kvantifikaci a správu dat
• Podpora dalších nástrojů třetích stran (Skyline, MetaboAnalyst)

Hlavní výsledky a diskuse

Intra­denní testy prokázaly průměrné biasy v rámci ±15 % pro kalibrační standardy a koeficient varibility (CV) nižší než 15 % pro QC vzorky. Mezilaboratorní srovnání koncentrací lipidů v NIST SRM 1950 ukázalo dobrou korelaci výsledků napříč osmi zapojenými pracovišti. Rozdíly mezi laboratořemi byly minimalizovány díky jednotnému postupu extrakce, kalibraci a kontrole kvality.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí vysokou propustnost s osmiminutovým během, automatizaci přípravy a zpracování vzorků, a nižší náklady na vývoj protokolu. Standardizované postupy usnadňují porovnávání dat v multi­laboratorních studiích a podporují zavádění lipidomiky do klinické praxe.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozvoj multiplexních protokolů pro souběžné multi­omické analýzy, implementace robustních QA/QC systémů a širší klinické validace v oblasti diagnostiky metabolických poruch, kardiovaskulárních onemocnění a personalizované medicíny.

Závěr

Studie prokázala, že cílená lipidomická platforma LipidQuan dosahuje vysoké reprodukovatelnosti výsledků mezi různými laboratořemi. Standardizace metodiky a jednotné kontrolní sady vedou k minimalizaci variance a umožňují spolehlivou kvantifikaci plasmatických lipidů.

Reference

1. Vvedenskaya O., Wang Y., Ackerman J. M. et al. Analytical challenges in human plasma lipidomics: A winding path towards the truth. TrAC Trends in Analytical Chemistry, 120, 115277 (2019).
2. Burla B., Arita M., Bendt A. K. et al. MS-based lipidomics of human blood plasma - a community-initiated position paper to develop accepted guidelines. Journal of Lipid Research, 59, jlr.S087163 (2018).