PREMIER Standards to Investigate the Inertness of Chromatographic Surfaces

Význam tématu

V mnoha aplikacích LC separací se vyskytují látky, které díky svým fosfátovým skupinám citlivě vážou kovové povrchy. Nezachycené nebo nepasivované kovové části v průtočné cestě mohou vést k významným ztrátám analyzovaných molekul, nekonzistentním výsledkům a nesprávným závěrům v běžné QA/QC i výzkumné praxi.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo ověřit inertnost nového chromatografického systému ACQUITY PREMIER vybaveného hybridními křemičitými povrchy („MaxPeak HPS“) a novými PREMIER standardy založenými na nehydrolyzovatelném analogu ADP (AMPcP). Studie porovnává výkon PREMIER systému se standardním biokompatibilním ACQUITY UPLC H-Class PLUS Bio systémem s ohledem na opakovatelnost, návratnost a tvar peaků kov- citlivých látek.

Použitá metodika a instrumentace

Všechny testy byly provedeny na dvou LC systémech:

• ACQUITY PREMIER System se speciálními povrchy MaxPeak HPS
• ACQUITY UPLC H-Class PLUS Bio System s kovovými průtočnými cestami

Detekce: UV při 260 nm, 10 mm kyveta, 40 Hz
Standardy:

• PREMIER AMPcP Standard (nehydrolyzovatelný ADP analog)
• PREMIER AMPcP a adenosin ve stechiometrickém poměru (negativní kontrola)

Metody:

• „No column“ test: přímé injekce standardu bez kolony pro hodnocení kovových interakcí
• Separateční metoda s ACQUITY PREMIER HSS T3 kolónou za použití gradientu amonium acetát/ACN + TFA

Nástrojový software: MassLynx v4.2

Hlavní výsledky a diskuse

Bez kolony klesla RSD plochy při pěti opakovaných injekcích AMPcP z 20 % na 0,2 % při přechodu z biokompatibilního na PREMIER systém. Zlepšila se nejen opakovatelnost, ale i absolutní plocha a tvar peaku. Při chromatografické separaci byla zjištěna vyšší plocha AMPcP a vyšší poměr AMPcP/adenosinu u PREMIER systému, zatímco plocha adenosinu zůstala u obou systémů prakticky stejná (rozdíl 1 %), což potvrzuje eliminaci kovových interakcí bez narušení celkové funkčnosti systému.

Přínosy a praktické využití metody

Nasazení ACQUITY PREMIER a PREMIER standardů přináší:

• Spolehlivou detekci a kvantifikaci kov-citlivých látek s nízkou variabilitou
• Možnost rychlého testu systémové připravenosti (system suitability) před analýzou vzorků
• Zvýšenou jistotu výsledků při analýzách problematických biopolymerů či nukleotidů

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření použití hybridních inertních povrchů ve všech typech LC systémů zaměřených na biologické a přírodní vzorky, kde kov- citlivé látky hrají významnou roli. Dále je možné vyvíjet nové QCRM standardy na bázi jiných nereaktivních analogů pro širší škálu analytických aplikací.

Závěr

PREMIER technologie s hybridními křemičitými povrchy významně snižuje sekundární kovové interakce, což se projevuje zvýšenou návratností a reprodukovatelností kov-citlivých analyz. AMPcP založené standardy slouží jako efektivní testovací nástroj pro potvrzení inertnosti LC systémů.

Reference

• Lauber M.; Walter T. H.; Gilar M.; DeLano M.; Boissel C.; Smith K.; Birdsall R.; Rainville P.; Belanger J.; Wyndham K. Low Adsorption HPLC Columns Based on MaxPeak High Performance Surfaces. Waters Application Note 2020, 720006930EN.