A Sensitive Microflow LC-MS/MS Method for the Analysis of Fluticasone Propionate in Human Plasma

Význam tématu

Flutikason propionát je inhalovaný glukokortikoid využívaný k profylaxi astmatu. Vzhledem k nízkým plazmatickým koncentracím po inhalaci (<10 pg/mL) je nezbytné mít vysoce citlivou bioanalytickou metodu pro správné stanovení farmakokinetiky.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo vyvinout a validovat kvantitativní mikroflow LC-MS/MS metodu pro stanovení flutikasonu propionátu v lidské plazmě s LLOQ pod 1 pg/mL. Klíčové prvky zahrnovaly multidimenzionální chromatografii (trap-and-elute) a optimalizovanou přípravu vzorku.

Použitá metodika

• Příprava vzorku: proteinová precipitace 0,2 M roztokem zinečnaté soli, SPE na Sep-Pak C18, eluce 90 % acetonitril/voda, sušení a rekonstituce v 25 % methanolu.
• Chromatografie: ACQUITY UPLC M-Class v microflow režimu (3 µl/min), iKey HSS T3 (150 µm × 50 mm, 1,8 µm) s trap kolonkou Symmetry C18 (300 µm × 50 mm).
• Mobilní fáze: A – 10 mM uhličitan amonný (pH 7,7); B – 90:10 methanol:isopropanol; gradient od 40 % B na 95 % B a zpět.
• MS/MS: Waters ionKey/MS s Xevo TQ-S v režimu ESI+, přechody 501,3>313,2 (analyzát), 504,3>313,2 (IS), capilární napětí 3,7 kV.

Použitá instrumentace

• ACQUITY UPLC M-Class System
• ionKey/MS System
• Xevo TQ-S Mass Spectrometer
• iKey Separation Device 150 µm × 50 mm, 1,8 µm HSS T3
• Sep-Pak C18 plate
• MassLynx 4.1 a TargetLynx software

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla LOD 0,244 pg/mL a LLOQ 0,488 pg/mL. Kalibrační křivky v rozsahu 0,488–250 pg/mL vykázaly koeficienty determinace r2 > 0,99, průměrnou přesnost 98–101 % a CV < 8,1 %. Robustnost potvrdilo 3000 opakovaných injekcí bez nárůstu systému tlaku a RSD 8 %.

Přínosy a praktické využití metody

• Kvantifikace flutikasonu propionátu na sub-pg/mL úrovni, klíčová pro farmakokinetické studie.
• Snížená spotřeba rozpouštědel oproti standardním průtokovým režimům.
• Zvýšená robustnost a ochrana kolony díky multidimenzionální trap-and-elute strategii.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se širší nasazení microflow LC-MS/MS pro nízkokoncentrované analyty, vývoj inertních povrchů pro neutrální a základní pH, plná automatizace vzorkové přípravy a nové ionizační zdroje pro další nárůst citlivosti. Integrace pokročilých kvantifikačních režimů umožní multiplexní analýzy.

Závěr

Vyvinutá microflow LC-MS/MS metoda splňuje požadavky na vysokou citlivost, přesnost a robustnost pro analýzu flutikasonu propionátu v lidské plazmě. Kombinace multidimenzionální chromatografie a optimalizované přípravy vzorku poskytuje spolehlivou platformu pro farmakokinetické studie.

Reference

• Mather J.; Rainville P.; Graham K.; Plumb R. A high sensitivity UPLC-MS/MS method for the analysis of fluticasone propionate in plasma. Waters Application Note, 2009.
• Waters Corporation. Using neutral and basic mobile phases in ACQUITY UPLC M-Class and ionKey/MS systems. P/N 715005272.
• Roman G.T.; Johnson J.; Murphy J.P.; Alelyunas Y.; Wrona M. Achieving great sensitivity, throughput, and robustness with ionKey/MS and trapping. Waters White Paper, 2016.