Ultrafast Analysis of Water-Soluble Vitamins

Význam tématu

Analýza vodou rozpustných vitamínů (B1, B2, B3, B6 a jejich derivátů) je klíčová pro farmaceutický, potravinářský a nutraceutický průmysl. Rychlá a spolehlivá identifikace a kvantifikace těchto látek umožňuje účinnou kontrolu kvality, zajištění shody s předpisy a optimalizaci nutričních přípravků.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo demonstrovat ultrarychlou chromatografickou metodu pro současné stanovení šesti vodou rozpustných vitamínů pomocí systému Nexera a kolony Phenomenex Kinetex C18 (2,6 µm, 100 mm × 4,6 mm). Studie zahrnuje test opakovatelnosti na standardních směsích i aplikaci na komerčně dostupné nutriční nápoje.

Použitá metodika a instrumentace

Byla zvolena reverzní fázová iontově párová chromatografie s gradientní elucí:

• Kolona: Phenomenex Kinetex 2,6 µm C18, 100 mm × 4,6 mm, 100 Å
• Mobilní fáze A: 20 mmol/l fosfátový pufr (pH 2,5) se 2 mmol/l sodium 1-hexansulfonátem
• Mobilní fáze B: směs fáze A a acetonitrilu v poměru 2:3
• Gradient: 5 % B (0 min) → 23 % B (1 min) → 100 % B (2–2,5 min)
• Průtok: 2,5 ml/min (mixer 180 µl), teplota kolony 40 °C, objem injekce 5 µl
• Detekce: UV při 275 nm, tlaková zátěž kolem 48 MPa
• Instrumentace: HPLC systém Shimadzu Nexera

Hlavní výsledky a diskuse

Na standardních směsích (100 µg/ml, riboflavin 20 µg/ml) byla dosažena výborná opakovatelnost retence (RSD časů ≤ 0,051 % n=6) a ploch píků (RSD ≤ 0,094 %). U vzorků nutričních nápojů byly všechny vitaminy separovány do 2,5 min a dobře rozlišeny bez významných interferencí matrix. Rychlost gradientu neovlivnila přesnost ani citlivost stanovení.

Přínosy a praktické využití metody

• Významné zkrácení doby analýzy (≤ 2,5 min na běh).
• Vysoká přesnost a opakovatelnost vhodná pro rutinní kontrolu kvality.
• Možnost paralelního vyhodnocení více vitamínů v jednom běhu.
• Minimalizace spotřeby organických rozpouštědel díky rychlému gradientu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Metoda může být rozšířena na další vitaminy a biomolekuly, využita při vývoji nutraceutik nebo v klinické diagnostice. Integrace s hmotnostní detekcí (LC–MS) by umožnila zvýšit selektivitu a citlivost a rozšířit pole aplikací na stopové analýzy.

Závěr

Ultrarychlá RP iontově párová chromatografie na systému Nexera s kolony Kinetex C18 umožňuje spolehlivé a efektivní stanovení šesti vodou rozpustných vitamínů do 2,5 min. Metoda nabízí výbornou opakovatelnost, krátkou dobu analýzy a jednoduchou implementaci v QA/QC laboratořích.

Reference

Shimadzu Corporation. Nexera Application Data Sheet No.16, Ultrafast Analysis of Water-Soluble Vitamins, March 2011.