A High Sensitivity LC/MS/MS Method for Quantitative Analysis of Eight Antifungal Drugs in Human Serum

Význam tématu

Infekce způsobené plísněmi vyžadují přesné dávkování antifungálních léků ke zvýšení efektivity léčby a minimalizaci toxicity.
Velká variabilita farmakokinetiky triazolů a echinokandinů u různých pacientů komplikuje stanovení optimálních dávek.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo vyvinout rychlou, vysoce citlivou metodiku LC/MS/MS pro simultánní kvantifikaci pěti triazolů (fluconazol, posaconazol, vorikonazol, hydroxyitrakonazol, itrakonazol) a tří echinokandinů (anidulafungin, kaspofungin, mikafungin) v lidské séru.
Studie zahrnovala optimalizaci separačních i hmotnostně-spektrometrických podmínek a vyhodnocení výkonu metody na navozených standardech v sérovém matrice.

Použitá metodika a instrumentace

• Příprava vzorku: proteinová precipitace směsí acetonitril/metanol (1:1, v/v), poměr sérum:kombinace 1:3, centrifugace a filtrace 0,2 μm nylonovým filtrem.
• UHPLC: Nexera (Shimadzu), kolona Kinetex C18 100×2,1 mm, 1,7 μm, teplota 40 °C, průtok 0,4 mL/min.
• Eluce: gradient od 5 % do 90 % organické fáze (acetonitril + 0,1 % kyseliny mravenčí) v průběhu 4–5,5 min, celkový běh 9 min.
• MS/MS: LCMS-8060 (Shimadzu) v pozitivním módu MRM, ESI při 300 °C, blok 400 °C, desolvační line 250 °C, Ar jako CID plyn (270 kPa), dusík jako nebulizační a sušící plyn.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla LOQ v rozmezí 1,3–131 ppt a lineárního rozsahu:

• 5–5000 ppt pro fluconazol a vorikonazol
• 20–5000 ppt pro posaconazol, hydroxyitrakonazol, itrakonazol, kaspofungin
• 200–5000 ppt pro anidulafungin a mikafungin

Linearity byly v rozmezí R2 0,9968–0,9998. Opakovatelnost (%RSD) při 200 a 1000 ppt činila 9–19 % u většiny analyz, u anidulafunginu a mikafunginu byla vyšší, odpovídající LOQ úrovním.
Recovery se pohybovala mezi 69–135 %, matrikový efekt mezi 39–119 %, což ukazuje na částečnou ztrátu účinnosti extrakce a vliv sérové matrice.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlý běh 9 minut umožňuje vysoký průtok vzorků v klinických laboratořích.
• Vysoce citlivé stanovení i nízkých koncentrací podporuje terapeutické monitorování a individualizaci léčby.
• Simultánní kvantifikace osmi často používaných antifungálních látek zvyšuje efektivitu analýzy.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření metody o další lékové třídy a metabolity pro komplexnější farmakokinetické studie.
• Integrace automatizované přípravy vzorků a on-line čištění pro zvýšení reproducibility.
• Validace metody na klinických vzorcích s cílem zavedení do rutinní diagnostiky TDM.

Závěr

Vyvinutá LC/MS/MS metoda je robustní, citlivá a rychlá pro simultánní kvantifikaci pěti triazolů a tří echinokandinů v lidské séru.
Poskytuje spolehlivé parametry pro terapeutické monitorování a klinický výzkum antifungálních léčiv.

Reference

1. van Wanrooy MJP, Santoe RN, van der Elst KCM et al. Ther Drug Monit. 35(6):778–784 (2013).
2. Theuretzbacher U. Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 23:805–812 (2004).
3. Farowski F, Cornely OA, Vehreschild JJ et al. Antimicrob Agents Chemother. 54(5):1815–1819 (2010).