Determination of Paralytic Shellfish Toxins and Tetrodotoxins in Shellfish by Ultra-High Performance Hydrophilic-Interaction Liquid Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry

Význam tématu

Paralytické škeble toxiny (PST) a tetrodotoxin (TTX) představují vysoce toxické látky produkované mořskými mikroorganismy a bakteriemi, které se akumulují v tkáních mlžů. Jejich konzumace může způsobit paralytické otravy (PSP), proto je nezbytné pravidelné a spolehlivé testování plodů moře v souladu s platnými regulačními limity.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem aplikace bylo vyvinout a ověřit rychlou, citlivou a přesnou metodu pro simultánní kvantifikaci PST i TTX v mlžích pomocí UHPLC-HILIC-MS/MS, která splňuje požadavky EU na monitoring a kontrolu kvality.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorek homogenizované tkáně mlžů byl extrahován 1% octovou kyselinou s následným vyčištěním na SPE kartáši s grafitovaným uhlíkem. Analýza probíhala na:

• UHPLC systém ACQUITY UPLC I-Class PLUS se sloupcem BEH Amide
• Xevo TQ-S tandemový kvartupólový hmotnostní spektrometr
• Softwarové platformy MassLynx v4.2 a TargetLynx XS

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala vysokou linearitu (r2 > 0,996) v matrix-matched kalibraci. Mezi dosažené limity patří LOD a LOQ pro většinu PST pod 10 µg STX ekv./kg a pro TTX LOD/LOQ <1 µg/kg. Recoverie toxinů v rozmezí 65–125 %, mezi-denní repetabilita (HorRat) <2, dlouhodobá reprodukovatelnost >85 % a absence interferencí potvrzují vhodnost metody pro regulační monitoring.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí:

• Jednoetapovou extrakci a rychlý test bez nutnosti derivatizace
• Vysokou citlivost a přesnost pro screening i kvantifikaci
• Možnost implementace v komerčních i státních laboratořích

Budoucí trendy a možnosti využití

Zaměření na multilaboratorní validace, rozšíření panelu analyzovaných toxinů, nasazení plně automatizovaných workflow a přenositelnost metody na další typy mořských potravin. Potenciál pro integraci do systémů rychlého nasazení při mimořádných událostech s výskytem červení vod.

Závěr

Vyvinutá UHPLC-HILIC-MS/MS metoda poskytuje spolehlivý, citlivý a účinný nástroj pro rutinní kontrolu PST a TTX v mlžích, splňuje legislativní požadavky EU a nabízí vysokou propustnost i reprodukovatelnost.

Reference

1. Hallegraef G. Harmful Algal Blooms: A Global Overview. UNESCO, 2003.
2. Turner A. et al. Detection of tetrodotoxin in European bivalves. Eurosurveillance 2015, 20(2):21009.
3. Regulation (EU) 2017/625 on official controls and other official activities.
4. Regulation (EC) No 853/2004 laying down specific hygiene rules for food of animal origin.
5. AOAC OMA 2005.06 pre-column oxidation LC-FLD method for PST.
6. Boundy M. et al. HILIC-UPLC-MS/MS method for PST. J. Chromatogr. A 2015, 1387:1–12.
7. Turner A. et al. Single-lab validation UPLC-HILIC-MS/MS for PST. J. AOAC Int. 2015, 98(3):609–621.
8. Turner A. et al. Single-lab validation LC-MS/MS for TTX in mussels and oysters. J. AOAC Int. 2015, 100(5).
9. EFSA CONTAM Panel. Scientific opinion on tetrodotoxin in marine bivalves. EFSA J. 2017;15:4752.