Quantitative Analysis of Favipiravir Spiked in Plasma Using by HPLC

Význam tématu

Favipiravir je slibný antivirotický lék původně vyvinutý proti chřipce a dnes testovaný v léčbě COVID-19. Kvantifikace jeho plazmatických hladin je nezbytná pro optimalizaci dávkování a sledování účinnosti bez rizika nežádoucích účinků. Metoda HPLC s fluorescenční detekcí přináší jednoduché a cenově dostupné řešení pro farmakokinetické studie a klinickou kontrolu léčby.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a validovat citlivou kvantitativní metodu pro stanovení favipiraviru v lidské plazmě pomocí standardního HPLC přístroje bez potřeby hmotnostní spektrometrie. Studie se zaměřila na dosažení lineárního pracovního rozsahu, vysoké přesnosti a opakovatelnosti analýzy.

Použitá instrumentace

Analýzu prováděl systém Nexera XR vybavený:

• Kolonou Shim-pack Scepter C18-120 (150 mm × 4,6 mm, 5 μm) s guard kolonkou Shim-pack Scepter C18-120 (10 mm × 4,0 mm, 5 μm)
• Fluorescenčním detektorem RF-20A (Ex 360 nm, Em 433 nm)
• Mobilními fázemi: A) 10 mmol/l fosfátový pufr pH 6,9 a B) methanol
• Injekčními vials TORAST-H (1,0 μl injekce)

Použitá metodika

Příprava vzorku zahrnovala deproteinizaci: smíchání 25 μl plazmy s 100 μl methanolu, centrifugaci a následné ředění supernatantu 15× mobilní fází. Chromatografie proběhla při 1,0 ml/min a 30 °C s gradientním programem:

• 0–7,5 min: 100 % fáze A
• 7,5–9,5 min: přechod na 30 % A / 70 % B
• 9,51–11 min: návrat na 100 % A

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda vykázala lineární odezvu v rozmezí 1–100 μg/ml (R2 = 0,999) s přesností (%RSD) 0,21–0,31 a přesností vyjádřenou jako recovery 92,1–106 %. Validace QC vzorků (2, 45, 90 μg/ml) prokázala opakovatelnost s %RSD 0,18–0,35 a accuracy 96,5–100 %. Chromatogramy ukázaly dobře oddělený vrchol favipiraviru bez interferencí od matrice plazmy.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rutinní sledování favipiraviru ve farmaceutickém i klinickém prostředí bez nutnosti drahého hmotnostního spektrometru. Díky jednoduché přípravě vzorku a standardnímu HPLC vybavení lze snadno implementovat v QA/QC laboratořích a výzkumných centrech.

Budoucí trendy a možnosti využití

Možné směry dalšího rozvoje zahrnují:

• Automatizaci přípravy vzorků pro vyšší průchodnost
• Komplexní analýzu metabolitů spojením s hmotnostní spektrometrií
• Adaptaci protokolu na jiné biologické matice, např. moč nebo tkáňové homogenáty
• Rozšíření metody na další antivirotika a farmaceutické látky

Závěr

Popsaná HPLC metoda pro stanovení favipiraviru v plazmě je rychlá, přesná a snadno implementovatelná v běžných laboratořích. Splňuje požadavky na citlivost i validaci a poskytuje spolehlivé výsledky pro farmakokinetické a klinické studie.

Reference

1. Brian B. Gowen et al., Alterations in favipiravir (T-705) pharmacokinetics and biodistribution in a hamster model of viral hemorrhagic fever, Antiviral Res., 2015
2. E. Takashita et al., Antiviral susceptibility of influenza viruses isolated from patients pre- and post-administration of favipiravir, Antiviral Res., 2016
3. K. Shiraki et al., Favipiravir, an anti-influenza drug against life-threatening RNA virus infections, Pharmacol. Ther., 2020