<a href="https://gcms.cz/article/972">V první části příspěvku o chvostování píků</a> jsme si řekli trošku teorie a podívali se, kdy dochází k tomuto jevu a co je jeho příčinou. V závěru jsme otevřeli téma turbulentního proudění kolonou, které je způsobeno primárně chybnou instalací GC kolony jako její seříznutí, správná délka v části injektoru a detektoru nebo těsnost tohoto spoje.
Turbulentní proudění průtoku vzorku kolonou můžeme nechtěně způsobit i nešikovným seříznutím kolony. Vliv na povahu proudění mají dále netěsnosti systému stejně jako obstrukce neboli překážky v proudění mobilní fáze. Příkladem obstrukci působících nečistot mohou být odštěpky septa, které se s rostoucím počtem nástřiků zákonitě dostávají do systému, nánosy netěkavých sloučenin ve skelné vatě lineru a podobně. 
Metaforicky lze nežádoucí jev turbulentního proudění přirovnat k vlivu kamene umístěného v rovnoměrném proudu vody horské říčky. Bezprostředně za kamenem vzniká turbulentní zpětný protiproud. Podobně bude pozměněn průtok nosného plynu a vzorku bezprostředně za jakoukoliv mechanickou nečistotou v GC koloně.
Někdy mohou být chvostující píky způsobeny nežádoucími polárními interakcemi mezi rozpouštědlem, rozpuštěnými látkami a stacionární fází kolony. Vždy pamatujte, že vodná rozpouštědla se nemísí s lipofilními látkami a naopak. Pokud je tedy pro vás problémem najít pro vzorek vhodné, v tomto směru optimální rozpouštědlo, pravděpodobně na následném chromatogramu uvidíte chvostující píky. Použité rozpouštědlo, vzorek i stacionární fáze kolony by si měly být látky blízké povahou své rozpustnosti ve vodě či v tucích. Chvostování píků bývá často projevem nesourodosti metody ve vlastnostech těchto látek. Optimalizovat shodu můžeme pochopitelně pouze změnou kolony a její stacionární fáze, nebo změnou rozpouštědla. Většina analytiků pak v tento moment raději strpí pokřivené píky, než aby zasahovali do parametrů metody.
V případě, že pozorujete chvostující nebo zkreslené píky pouze u látek s retenčními časy blízkými rozpouštědlu nebo píku hlavního analytu směsi, jedná se o reverzní efekt rozpouštědla. Látky eluující se v blízkosti rozpouštědla podléhají totiž při separaci nejen afinitě stacionární fáze, ale i afinitě rozpouštědla a jejich setrvávání na stacionární fázi tudíž není dostatečné pro optimální tvar a rozlišení píků. Tento jev si lze představit i jako jakousi soutěž mezi stacionární fázi a rozpouštědlem o vazbu s daným analytem. Ideální prevencí reverzního efektu rozpouštědla je použití 3 až 5 metrů dlouhé, deaktivované křemíkové předkolony.
Ve videu výše můžete ve zkrácené délce vidět příklad takové předkolony. Její vliv na eliminaci reverzního efektu rozpouštědla můžete vidět na obrázku.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_hromatogram_vlevo_znazornuje_separaci_na_GC_systemu_bez_zapojeni_predkolony_retencniho_gapu_2_f7ab0c9605/HPST-hromatogram-vlevo-znazornuje-separaci-na-GC-systemu-bez-zapojeni-predkolony-retencniho-gapu-2..png" alt="HPST: Chromatogram vlevo znázorňuje separaci na GC systému bez zapojení předkolony/retenčního gapu. Chromatograf vpravo znázorňuje ten samý nástřik do systému se zařazenou předkolonou. U analytů 1,2 a 3 lze vpravo pozorovat výrazné zlepšení rozlišení a tvaru píků vlivem předkolony."/>
Pokud při splitless či on-column nástřiku pozorujete jev chvostujících píků snižující se se stoupajícím retenčním časem analytů, jedná se o přetrvávající reverzní efekt rozpouštědla. K nápravě tohoto jevu dopomůže snížení teploty kolony na počátku nástřiku, čímž zvýšíte fokusaci rozpouštědla. Obvykle se teplota v této souvislosti snižuje o 10 až 20 °C pod bod varu rozpouštědla. Na obrázku vidíte rozdíl v separaci a tvaru píků při fokusaci hexanu nastavením počáteční teploty kolony na 50 °C (teplota varu hexanu 68-69 °C).
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Na_obrazku_vidite_rozdil_v_separaci_a_tvaru_piku_pri_fokusaci_hexanu_nastavenim_pocatecni_teploty_kolony_na_50_C_teplota_varu_hexanu_68_69_C_7fa71f9dd7/HPST-Na-obrazku-vidite-rozdil-v-separaci-a-tvaru-piku-pri-fokusaci-hexanu-nastavenim-pocatecni-teploty-kolony-na-50-C-(teplota-varu-hexanu-68-69-C)..jpg" alt="HPST: Vliv teploty nástřiku na fokusaci rozpouštědla v plynové chromatografii."/>
Při počáteční teplotě kolony 70 °C je fokusační efekt zanedbatelný (vlevo), zatímco po snížení teploty na 50 °C dojde k znatelnému zúžení prostoru kondenzace rozpouštědla na počátku kolony – fokusaci, a tím i ke zlepšení tvaru píků ostatních analytů (vpravo).
Při splitovaném nástřiku se snažte docílit minimálního průtoku nosného plynu inletem 20 ml/min, lépe pak alespoň 30 ml/min. Nižší rychlosti proudu nosného plynu budou opět přispívat k chvostování píků, jak ukazuje následující obrázek.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Vliv_prutoku_nosneho_plynu_pri_Split_nastriku_v_plynove_chromatografii_231433e377/HPST-Vliv-prutoku-nosneho-plynu-pri-Split-nastriku-v-plynove-chromatografii..jpg" alt="HPST: Vliv průtoku nosného plynu při Split nástřiku v plynové chromatografii."/>
Povšimněte si chvostování prvních dvou píků. Splitovací poměr během tohoto nástřiku byl poměrně nízký (5:1) a průtok nosného plynu inletem následně již nebyl dostatečný, aby zajistil potřebně rychlý vstup většího objemu vzorku na kolonu. Zde byl průtok kolonou 1 ml/min. Při splitovacím poměru 5:1 se tak se započtením průtoku oplachu septa (3 ml/min) dostáváme na celkový průtok inletem pouhých 10 ml/min, což je příliš málo pro dostatečně rychlý proces vstupu vzorku na kolonu. 
Část těkavějších analytů tak již začíná procházet kolonou v momentě, kdy jejich úplný objem ještě zcela nestihl vstoupit na stacionární fázi kolony. Píky právě těchto složek následně na chromatogramu chvostují. Méně těkavé složky, později eluující analyty, které se kolonou pohybují pomaleji, tento jev nepostihne, protože mají vyšší bod varu a vstupují na kolonu jednotně i za vyšších počátečních teplot gradientu metody.
Pomoci si v tomto případě můžete zvýšením splitovacího poměru a tím pádem zmenšením objemu vzorku vstupujícího na kolonu. Samozřejmě tak můžete učinit pouze pokud víte, že další zředění vzorku následně neohrozí citlivost detekce analytů nižších koncentrací. Efekt zvýšení splitovacího poměru ukazuje obrázek níže.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Vliv_zvyseni_splitovaciho_pomeru_pri_nastriku_v_plynove_chromatografii_f75dbf4569/HPST-Vliv-zvyseni-splitovaciho-pomeru-pri-nastriku-v-plynove-chromatografii..jpg" alt="HPST: Vliv zvýšení splitovacího poměru při nástřiku v plynové chromatografii."/>
<h3>Příčiny chvostování píků a jejich řešení:</h3>
<ol>
<li>Znečištění prostoru inletu</li>
</ol>
<ul>
<li>Proveďte základní údržbu inletu. Vyměňte liner, o-těsnění, septum, pokud je třeba, tak i zlaté těsnění.</li>
</ul>
<ol start="2">
<li>Příliš špinavé vzorky</li>
</ol>
<ul>
<li>Zvažte změnu přípravy vzorku, případně začleňte další kroky, například filtraci vzorku, aby se problém neobjevil znovu.</li>
</ul>
<ol start="3">
<li>Zanesení počátku kolony netěkavými látkami, nečistotami</li>
</ol>
<ul>
<li>Seřízněte kolonu. Zkrácení kolony většinou tento problém vyřeší.</li>
</ul>
<ol start="4">
<li>Přítomnost mechanické překážky toku mobilní fáze</li>
</ol>
<ul>
<li>Pakliže nic z předešlého nepomohlo, otestujte kolonu na přítomnost mechanické překážky průtoku nástřikem hexanu nebo butanu. Tyto látky by při plynulém průtoku neměly jevit jakékoliv deformace píků.</li>
</ul>
<ol start="5">
<li>Špatně nainstalovaná kolona</li>
</ol>
<ul>
<li>Uvolněte kolonu z inletu a detektoru a pečlivě ji opětovně připojte znovu zpět.</li>
</ul>
<ol start="6">
<li>Nekompatibilní hydrofilita/lipofilita rozpouštědla, vzorku a stacionární fáze.</li>
</ol>
<ul>
<li>vyzkoušejte jiné rozpouštědlo, jiný typ kolony.</li>
</ul>
<ol start="7">
<li>Chvostují píky vysoce těkavých analytů v blízkosti píku rozpouštědla</li>
</ol>
<ul>
<li>Nainstalujte 3 až 5 metrů dlouhou deaktivovanou křemíkovou předkolonu.</li>
</ul>
<ol start="8">
<li>Při metodě využívající on-column či splitless nástřiku se jev chvostování objevuje u všech analytů a klesá se stoupajícím retenčním časem sloučeniny</li>
</ol>
<ul>
<li>Uvažujte vliv přetrvávajícího reverzního efektu rozpouštědla. Snižte počáteční teplotu metody na 10 - 20 °C pod teplotu bodu varu rozpouštědla.</li>
</ul>
<ol start="9">
<li>Problém se objevuje u těkavých, brzy eluujících analytů během splitovaného nástřiku</li>
</ol>
<ul>
<li>Zkontrolujte, zda nemáte příliš malý splitovací poměr, tudíž na daný průtok inletem příliš velký objem vzorku vstupujícího na kolonu.</li>
</ul>
<h3>Nepřehlédněte</h3>
Přehled videí věnující se údržbě Vašeho GC (instalace GC kolony, výměna lineru, septa, splitovacího trapu a zlatého těsnění) od Agilent Technologies naleznete v článku <a href="https://gcms.cz/article/873">Údržba Vašeho GC - série videí od Agilent Technologies</a>

Údržba Vašeho GC. Chvostující píky (2. část)

Představujeme video průvodce instalací kapilárních GC kolon. Tento postup bude vhodný pro většinu kapilárních <a href="https://www.labicom.cz/produkty/spotrebni-material/plynova-chromatografie-prislusenstvi/gc-kolony-predkolony/agilent">kolon</a>, které Agilent vyrábí (více o kolonách i v článku <a href="https://hpst.cz/agilent-gc-kolony-ultra-inert-wax-intuvo">Agilent GC kolony - Ultra Inert, Wax, Intuvo</a>) Pro vaší novou GC kolonu však mohou platit specifické instalační postupy, čí nestandardní péče a údržba. Určitě si proto vždy přečtěte všechny informace, které dorazí spolu s novou kolonou.
K výměně kolony budete potřebovat hned několik pomůcek. Bude třeba nějaký nástroj pro řezání kolon. Příkladem je keramická žiletka. V dnešní době se vzhledem ke své praktičnosti stává téměř standardem a ostatní alternativy skoro vymizely. Je dobré mít po ruce lupu, abyste zkontrolovali průřez kolonou. Pokud používáte FID detektor, může se vám hodit mít zásobu nějaké kolonou nezadržované sloučeniny, jako například metanu nebo butanu. Pro MS můžete použít argon. Je dobré mít po ruce také <a href="https://www.labicom.cz/produkty/spotrebni-material/plynova-chromatografie-prislusenstvi/prutokomery-rotametry-detektory-netesnosti">elektronický průtokoměr</a> a detektor netěsností. Můžete mít připravenou i testovací směs k separaci po dokončení instalace kolony, ale není to nutné, protože každá Agilent kolona je před odesláním klientům předem otestována, takže vy už máte automaticky jistotu, že vše bude fungovat podle očekávání, a to okamžitě po vybalení z krabice. Dobré je si připravit i jeden ze svých standardů, abyste si mohli posléze ověřit, že je vše správně nainstalováno a správně nastaveno. Samozřejmě se budou hodit ochranné brýle a mnozí rádi používají i rukavice při manipulaci s kolonou.
Použití rukavic bývá často předmětem diskuse. Stačí zajistit, aby se nic nedostalo do kontaktu s koncem kolony, který bude po instalaci součástí cesty vzorku. Tyto nečistoty by pak vycházely ze systému během analýz. Jakékoliv nečistoty se z kolony zdlouhavě vymývají, ale obzvlášť houževnaté jsou oleje. Určitě byste na chromatogramu neradi vídali svůj oběd, jak je ukázáno ve videu, jak například vypadá chromatogram smažené hranolky. Analytik držel hranolku 5 vteřin a následně si otřel ruce, aby odstranil co možná nejvíce mastnoty. Následně se lehce dotknul konce kolony nad ferulkou, upevnil do inletu a hleďme… Smažená hranolka! 
I olejové nečistoty se ze systému po čase dostanou, ale lépe je tam vůbec v první řadě nezanést. Znamená to, že je potřeba používat rukavice? Rozhodně ne, jen je třeba se před instalací ujistit, že máte čisté ruce. Ovšem i „čistota“ může být problém. Ve videu můžete vidět chromatogram tekutého mýdla po podobném experimentu. Pamatujte, že stačí opravdu málo. Rukavice nejsou nezbytné a pokud vám vyvstane podobný problém, jako výše popsané, vezměte čistý laboratorní hadřík, namočte do acetonu nebo metanolu a konec kolony před upevněním očistěte. Pokud vás podobný chromatogram nevyděsí, nedělejte si s tím starosti.
Než se pustíte do instalace, je dobré zkontrolovat trapy na vychytávání nečistot v nosném plynu, zda nejsou prošlé/nasycené a pokud je třeba, vyměnit je. Ve videu je ukázána práce na novém stroji čili naše trapy jsou čerstvé. Protože máte z důvodu výměny kolony vše vypnuté, je vhodná doba zkontrolovat i veškeré <a href="https://www.labicom.cz/produkty/spotrebni-material/plynova-chromatografie-prislusenstvi/gc-kolony-predkolony/agilent">spotřební díly</a> inletu. Vyměňte septum, zkontrolujte liner, zda není viditelně špinavý a nepotřebuje vyměnit. Často je třeba výměny, aniž by nečistoty byly vidět, protože již nepatrný záchyt může narušit inertnost inletu. Projevem takového znečištění bývá pokles odezvy obecně, nebo chvostování píků aktivních sloučenin (více o chvostování píků v článcích <a href="https://hpst.cz/udrzba-vaseho-gc-chvostujici-piky">Údržba Vašeho GC. Chvostující píky</a> a <a href="https://hpst.cz/udrzba-vaseho-gc-chvostujici-piky-2-cast">Údržba Vašeho GC. Chvostující píky (2. část)</a> Pokud vyměňujete liner, ujistěte se, že jste nasadili i nový O-kroužek. O-kroužky stárnou a ztrácejí s časem elasticitu, což snižuje jejich těsnící vlastnosti. Pokud máte špinavý, či poškozený liner, je pravděpodobné, že stacionární fáze v úvodní části kolony je v podobném stavu. Kolony s kapalnou stacionární fází mohou být při vyšší než pokojové teplotě snadno poškozeny přítomností kyslíku. Proto se po instalaci ujistěte, že nikde není netěsnost. Agilent doporučuje využívání trapy jako zvýšení ochrany proti nečistotám vstupujícím do systému, čímž prodlužujete životnost kolon a minimalizujete šum na pozadí. Při zkracování kolon musíme být opatrní, protože jsou ze skla. Ochranné brýle jsou povinností.
Prvně zavěsíme kolonu do pece chromatografu na závěsný držák tak, aby se v žádné své části nedotýkala stěny pece. Nyní potřebujeme odmotat dostatečný kus kolony tak, abychom si vytvořili lehce zaoblenou část vedoucí do inletu. Vyhněte se ostrým ohybům, které by napínaly kapiláru a mohly by způsobit až její zlomení. Ujistěte se, že se kolona nedotýká žádných ostrých hran. Dále vyměňte matičku s ferulkou na jedné straně kolony. My na kolonu rádi nejprve napíchneme septum, protože to nám následně pomůže v odměřování délky konce. Konce kolony nejsou nijak odlišené, nicméně většina analytiků instaluje kolonu tak, že závěsný držák je otevřený směrem ke dveřím pece.
Konec kolony seřezáváme poté, co jsme umístili matičku s ferulkou, aby nám na konci kolony nezůstal žádný odštěpek z ferulky. Koncovku kolony držte tímto způsobem. Když přejedete prsty po hraně keramické žiletky, zjistíte, že má hladkou a hrubou hranu. Kolonu budete řezat její hladkou hranou. Jedním pohybem přetáhněte žiletku v lehkém úhlu přes hranu kolony. Neměli byste tlačit natolik, aby se kolona zlomila, ale pouze tak, abyste narušili vnější polyamidovou vrstvu a nařízli skleněnou kapiláru pod ní. Uchopte kolonu na obou stranách řezu a ohněte ji směrem od naříznuté strany. Někdy stačí do odříznutého konce kolony pouze klepnout a část se sama oddělí. Zkontrolujte povrch řezu kolonou pomocí lupy. Ujistěte se, že řez je v pravém úhlu ke kapiláře a že na něm nejsou žádné odštěpky, hrbolky, nerovnosti. Pokud není hladký, opakujte znovu.
Optimální délka kolony, která se vsunuje do prostoru inletuje u většiny instalací do S/SL inletu 4-6 mm od kraje ferulky ke špičce kolony. Tato vzdálenost se může pro některé speciální linery lišit. Chceme docílit, aby se špička kolony nacházela těsně nad povrchem zlatého těsnění. Trochu výše je v pořádku, příliš nízko může být problém. Po odměření délky je vhodná chvíle k omytí konce kolony hadříkem navlhčeným v acetonu či metanolu, jak bylo zmíněno dříve. Pokud zavádíte kolonu do jiného než S/SL inletu, ověřte vhodnou délku jejího konce a postup v instalačním manuálu. Jakmile je kolona v patřičné pozici, utáhněte ručně matičku s ferulkou. Poslední půlotáčku dotáhněte pomocí klíče. Pokud lze v závitu s kolonou stále hýbat, utáhněte o další čtvrtotáčku. Nedotažení kolony a ponechání netěsnícího spoje povede k okamžitému a nevratnému poškození kolony v momentě ohřevu. V momentě dotahování s kolonou nehýbejte. V minulosti se k označení délky koncovky kolony používal tekutý papír, raději používáme septum, které nám zároveň zajistí ferulku s matičkou v přesné pozici. Septum nezapomeňte na kolonu nasadit ještě před matičkou a ferulkou, čímž docílíte tohoto elegantního a jednoduchého řešení.
Ferulky, obzvláště ty grafitové, mění po zahřátí lehce tvar. Pokud jste kolonu instalovali do chladného inletu a detektoru, po zahřátí spoje dotáhněte. Součástí optimální praxe je zkontrolovat spoje i po kondicionaci kolony, abyste si mohli být opravdu jistí, že vše těsní. Upravte vstupní tlak na čele kolony tak, abyste získali rozumný průtok nosného plynu. Nastavení se může lišit v závislosti na parametrech kolony a použitém nosném plynu. Například pro 30m kolonu s heliem jako nosným plynem bude vstupní tlak čela kolony někde mezi 50 a 25 psi pro kolony s vnitřním průměrem 0.25 mm. Tyto hodnoty jsou pouze doporučenými počátečními hodnotami. Konečný vstupní tlak bude samozřejmě záviset na požadovaném průtoku nosného plynu ve vaší metodě…
Více v příštím článku Instalace a výměna GC kolon (2. část).
Pro další informace se obracejte na produktového specialistu Daniela Sandera (daniel.sander@hpst.cz).

GC kolony - instalace a výměna (1. část)

Pokračování článku <a href="https://gcms.cz/article/1563">GC kolony - instalace a výměna (1. část)</a>…
Dále položíme volný konec kolony (detektorový konec) do malé vialky s vodou, hexanem nebo jiným vhodným rozpouštědlem a měli bychom pozorovat rovnoměrný proud bublinek. Pokud nevidíte bublinky, bude třeba zkontrolovat zdroj nosného plynu, průtok plynu inletem a další nastavení GC, zda někde nedochází k úniku. Jakmile vidíte bublinky, vše je v pořádku. Po kontrole opět očistíme konec kolony od zbytků rozpouštědla acetonem či metanolem napuštěným hadříkem.
Jako nosný plyn doporučujeme používat vysoce čistý vodík nebo helium. Dříve se často používal i dusík, ale u většiny aplikací se v poslední době již nedoporučuje. Ať už používáte kterýkoliv nosný plyn, doporučujeme minimální čistotu 99,995 %. Nejčastější nečistotou bývá kyslík a jeho přítomnosti je třeba se vyhnout. V nosném plynu by ho mělo být méně než 1 ppm, neboť může při zahřátí ničit kolony systému.
Při nainstalování kolony do detektoru budeme postupovat stejně, jako tomu bylo v případě inletové strany. Na konci kolony už máme nasunuté septum, matičku i ferulku, kolonu jsme seříznuli čistým řezem a nyní konec jednoduše jen zasuneme do detektoru. Na doraz a pak malinko povytáhnout.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Instalace_GC_kolony_mereni_spravne_vzdalenosti_f7d2e76d6f/HPST-Instalace-GC-kolony-mereni-spravne-vzdalenosti.png" alt="HPST: Instalace GC kolony - meření správné vzdálenosti"/>
Měli bychom také zkontrolovat, zda vše těsní. K tomu můžete použít elektronický detektor netěsností. Zkontrolujte oba body propojení, jak prostor na vstupu do inletu, tak prostor na vstupu do detektoru. Elektronická kontrola tlaku umožňuje snižovat či zvyšovat lineární rychlost nebo průtok nosného plynu systémem. Je stěžejní, abyste do softwaru na počítači (<a href="https://gcms.cz/products/24">OpenLab</a>), nebo pomocí GC klávesnice či dotykového displeje zadali správné parametry kolony, aby bylo možné následně nastavit odpovídající hodnoty rychlosti a průtoku nosného plynu. Vždy se podívejte do souhrnného přehledu vlastností kolony, který bývá součástí balení, abyste zadali přesnou hodnotu vnitřního průměru kolony.
Nyní přichází vhodná chvíle pro nástřik vaší testovací směsi, nebo kontrolního standardu pro ověření nastavení GC. Tento vzorek obsahuje látku nebo více látek o známých retenčních časech, které nám následně ověří, že nastavení GC je správné. Samozřejmě očekáváme i ostré píky, které jsou pak dalším potvrzením úspěšné instalace kolony.
Lineární rychlost nosného plynu můžeme ověřit nástřikem látky, která není na koloně zadržována. Začneme s nastavením teploty pece na přibližně 35 až 40 °C. Nyní provedeme nástřik 1 až 2 μl nezadržované látky při nastavení S/SL inletu do módu split. Pokud máte na GC pouze megabore direct, on-column, nebo splitless injektor, které vám neumožňují splitovat zplyňený objem vzorku v inletu, zřeďte vzorek před nástřikem o něco více, aby vám nezahltil detektor. Většina laboratoří k tomuto účelu využívá metan, ale dobrým trikem, který se také vidí často, je butanový zapalovač na cigarety. Je snadno dostupný a vše, co potřebujete, je přece pouze trocha plynu. Dejte pozor, abyste při natahování do jehly neškrtnuli a natáhněte 1 či 2 μL. Následně nastříkněte do inletu, spusťte GC analýzu a na chromatogramu hledejte velmi ostrý, symetrický pík. Při splitless nástřiku můžeme pozorovat mírný jev chvostování píku. Pokud se na chromatogramu neobjeví žádný pík, je možné, že nosný plyn neprotéká systémem. Zkontrolujte regulátory průtoku, zdroj nosného plynu a ovladače průtoku, zda je vše patřičně nastaveno. Ujistěte se, že správně pracuje detektor, záznam signálu i jehla stříkačky. Pokud vám kolonou nezadržovaná látka chvostuje, je možné že dochází k úniku nosného plynu v prostoru inletu, špatně jste připojili kolonu, nebo nastavili příliš nízký splitovací poměr. Přeinstalujte kolonu, zkontrolujte nastavení a zkontrolujte také inlet na netěsnosti. Než budete pokračovat, potřebujete zaznamenat symetrický pík.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Nastrik_nezadrzovane_latky_pro_kontrolu_cesty_vzorku_0bf5f0f858/HPST-Nastrik-nezadrzovane-latky-pro-kontrolu-cesty-vzorku.png" alt="HPST: Nástřik nezadržované látky pro kontrolu cesty vzorku"/>
Nyní kondicionujeme kolonu. Zahřátím kolony bez průtoku nosného plynu nebo za přítomnosti kyslíku v nosném plynu kolonu zničíme. Nejprve se ujistěte, že veškerý kyslík byl z kolony vytlačen. Za tímto účelem kolonu proplachujte zhruba 15 minut nosným plynem. Následně kolonu zahřejte na její horní teplotní limit, nebo 10 až 20 °C nad nejvyšší operační teplotu vámi používané metody. Z těchto dvou možností vyberte nižší variantu maxima. Nepřekračujte maximální teplotní limit kolony, jinak jí poškodíte. Rychlost ohřevu není stěžejní, ale absence kyslíku a plně těsnící systém jsou nutností. Během kondicionace kolony pozorujte baseline. Můžete vidět určité artefakty, píky nečistot zanesených během instalačního procesu, ale tyto by neměly v systému přetrvávat. Po tom, co kolona dosáhne kondicionační teploty, sledujte chování baseline. Pokud roste spolu s rostoucí teplotou systému, opět zkontrolujte systém na netěsnosti. Pokud vyroste a vrátí se na základní úroveň, možná jste právě vymyli nějakou nečistotu o vysoké molekulové hmotnosti, která se do kolony dostala během instalace. Ideální odezvou je plochá baseline. Této odezvy byste měli dosáhnout poměrně brzy, v závislosti na kondici instrumentu, ve které se nacházel v momentě instalace. Můžete být hotovi do 15 minut, ale někdy vše trvá třeba až 60 minut od momentu dosažení kondicionační teploty. Pokud se baseline neustálí do 2 až 3 hodin a není konstantní, ukončete kondicionaci. Nestabilní baseline může být důsledkem netěsnosti kdekoliv na trase nosného plynu, nejen v prostoru inletu a může být také zapříčiněna kontaminací systému. Nejlepším řešením, než budete pokračovat, je pochopitelně zchladit systém a najít a odstranit příčinu.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Baseline_a_sum_69d3969804/HPST-Baseline-a-sum.png" alt="HPST: Baseline a šum"/>
Polární stacionární fáze a kolony o větších průměrech (tzv. wide bore) obvykle vyžadují delší stabilizační časy než kolony s menším průměrem (tzv. narrow bore) a nepolární stacionární fáze. PLOT kolony (porous layer open tubular) vyžadují speciální kondicionační procedury. U těchto kolon opět vždy postupujte podle souhrnného přehledu vlastností kolony. Zde byste vždy měli najít vhodný postup.
Co se týká <a href="https://gcms.cz/products?manufacturerItems=10&amp;category=1">Plynových chromatogafů s ECD detektorem</a> a <a href="https://gcms.cz/products?manufacturerItems=10&amp;category=5">hmotnostních (MS) detektorů</a>, někteří analytici mají za to, že ke kondicionaci kolony dojde rychleji když kolona během procesu není připojena k detektoru. Tímto postupem se však nedozvíte nic o stabilitě baseline, nebo netěsnostech systému. Pokud budete kondicionovat kolonu při netěsnosti v systému, způsobíte její nevratné poškození, které povede k vysoké krvácivosti stacionární fáze nebo k jejímu aktivování a následné ztrátě inertnosti. Pokud je kolona kondicionována, přičemž detektorový konec je odpojen, doporučujeme konec následně zkrátit, protože mohlo dojít k jeho poškození. Odstřihněte 10 až 20 cm volného konce kolony, než jej připojíte do detektoru.
U kapilárních GC kolon je průměrná lineární rychlost mnohem spolehlivějším a lepším měřítkem pohybu nosného plynu než objemový průtok. Rychlost hovoří pouze o rychlosti plynu, takže nepotřebujeme znát vnitřní objem kolony nebo její vnitřní průměr. Viskozita nosného plynu je závislá na teplotě prostředí, a proto při různých teplotách potřebujete různé tlaky, abyste dosáhli stejné průměrné lineární rychlosti nosného plynu. Proto nastavujte průměrnou lineární rychlost nosného plynu dané analýzy vždy při stejné teplotě. Touto teplotou pak většinou bývá počáteční teplota pece. Pokud chcete, můžete si průměrnou lineární rychlost vypočítat sami při nástřiku 1 až 2 μL kolonou nezadržované látky, jak jsme nastínili dříve, s následným vsazením retenčního času píku do následující rovnice. Vstupní tlak upravujte tak dlouho, dokud nedostanete patřičnou průměrnou lineární rychlost nosného plynu. U <a href="https://www.hpst.cz/plynova-chromatografie/plynove-chromatografy">plynových chromatografů s elektronickou kontrolou tlaku</a> můžete lineární rychlost nosného plynu zadat na počítači nebo přímo na klávesnici/displeji chromatografu. Jak jsme zmínili dříve, musí být zadány správné hodnoty a rozměry. Rozměry opět hledejte v souhrnném přehledu vlastností kolony, abyste měli jistotu jejich správnosti. Délku můžete odhadnout spočítáním smyček kolony na držáku a vynásobením délkou 0.54m u standardních kolon nebo násobením délkou 0.4m u kolon s 5 palcovými držáky. Pro další detaily kontaktuje technickou podporu Agilent, nebo <a href="https://www.hpst.cz/servis">servisní oddělení vašeho distributora</a>.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Chromatogram_slepeho_blank_nastriku_v_case_086fbd0df7/HPST-Chromatogram-slepeho-blank-nastriku-v-case.png" alt="HPST: Chromatogram slepého - blank nástřiku v čase"/>
Vždy je dobré vědět, jak vypadá váš systém bez přítomnosti vzorku, nebo během slepého nástřiku. Tato informace se vám bude hodit později v momentě, kdy budete hledat příčinu jakýchkoliv obtíží či nesrovnalostí v odezvě systému, pokud nastanou. Po kondicionaci kolony tedy neváhejte a proveďte slepý nástřik. Můžete využít váš standardní teplotní program, nebo třeba následující. Začněte na 40 až 50 °C s gradientem 10 až 20 °C/min až na jakoukoliv nejvyšší limitní teplotu platnou pro vaši metodu, například 300 °C, a tuto teplotu držte po 10 až 15 minut. Chromatogram pozadí si následně uložte pro budoucí porovnání. Jak jsme zmínili dříve, může se vám hodit při hledání příčin nežádoucí odezvy. Na chromatogramu slepého nástřiku by neměly být žádné píky. Případné píky během slepého nástřiku poukazují na problém kontaminace cesty vzorku před kolonou, obvykle tedy v prostoru inletu, nebo dokonce ještě před ním. Jak se kolona s používáním opotřebovává, zvyšuje se míra vzestupu základní linie. Pokud se nárůst základní linie objevuje už při mnohem nižších teplotách, než jste pozorovali při poslední kontrole, velmi pravděpodobně došlo buď ke kontaminaci kolony, nebo dokonce k jejímu poškození, případně ke kontaminaci GC systému.
Pro další informace se obracejte na produktového specialistu Daniela Sandera (daniel.sander@hpst.cz).

GC kolony - instalace a výměna (2. část)

Náš tým servisních techniků poskytuje širokou škálu autorizovaných servisních služeb (instalace a opravy, preventivní prohlídky, funkční verifikace a operační kvalifikace) jak pro přístroje Agilent Technologies, tak i pro instrumentace dalších výrobců. Servisní oddělení také poskytuje vzdálenou podporu a ve spolupráci s aplikačním týmem pořádá pravidelná hardwarová a softwarová školení pro uživatele i pro pokročilé analytiky.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Instrumentace_s_pridanou_hodnotou_diky_silnemu_servisnimu_tymu_a_pravidelnym_skolenim_c6e88a2b2f/HPST-Instrumentace-s-pridanou-hodnotou-diky-silnemu-servisnimu-tymu-a-pravidelnym-skolenim.webp" alt="HPST: Instrumentace s přidanou hodnotou díky silnému servisnímu týmu a pravidelným školením"/>
<h3>Hardwarová a aplikační školení</h3>
<h5>Na hardwarových školeních se naučíte:</h5>
<ul>
<li>principy fungování daných systémů</li>
<li>správné pracovní postupy</li>
<li>provádění základní údržby i diagnostiky pro řešení běžných problémů</li>
</ul>
Nabyté znalosti Vám tak usnadní a zpříjemní práci, sníží náklady na údržbu, zajistí maximální spolehlivost přístrojů a tím sníží riziko poruch. Školení jsou vhodná pro všechny uživatele systémů Agilent Technologies i pro ty, kteří uvažují o nákupu stroje a chtějí získat podrobnější informace o fungování a technickém zpracování strojů.
<h5>Na aplikačním školení se naučíte:</h5>
<ul>
<li>principy chromatografie</li>
<li>úpravy vzorku</li>
<li>základy vývoje chromatografických metod včetně volby kolony</li>
<li>seznámíte se s chromatografickými parametry užívanými v praxi.</li>
</ul>
Aplikační školení jsou určena pro ty, kteří chtějí získat nebo prohloubit stávající znalosti o chromatografických principech a jejich převádění do praxe, tzn. pro stávající uživatele i pro studenty.
<h5>Nabízená hardwarová školení:</h5>
<ul>
<li>👉 <a href="https://hpst.cz/lc-skoleni-uzivatelske-dovednosti-diagnostika">LC školení, uživatelské dovednosti a diagnostika</a></li>
<li>👉 <a href="https://hpst.cz/gc-skoleni-uzivatelske-dovednosti-diagnostika">GC školení, uživatelská dovednosti a diagnostika</a></li>
<li>👉 <a href="https://hpst.cz/ms-single-quadqqq-pro-gc-skoleni-uzivatelske-dovednosti-diagnostika">MS (single-quad/QQQ pro GC) školení, uživatelské dovednosti a diagnostika</a></li>
</ul>
<h3>Softwarová školení</h3>
<h5>Na školení se dozvíte podrobnější informace k:</h5>
<ul>
<li>instalaci softwaru a licencím</li>
<li>nastavení softwarového rozhraní dle Vašich požadavků</li>
<li>možnosti detailního ovládání instrumentu</li>
</ul>
<h5>Naučíte se:</h5>
<ul>
<li>jak efektivně pracovat se sekvencemi</li>
<li>jak kalibrovat metodu</li>
<li>jak zpracovat naměřená data</li>
</ul>
Dostatek času je věnován také nastavení reportů dle požadavků uživatele – tzv. „intelligent reporting“.
Školení kladou důraz na dostatečný prostor pro praktická cvičení a diskusi se školitelem, proto jsou dle typu software v rozsahu čtyř až pěti dnů. Pro účastníky je po celou dobu kurzu zajištěno ubytování a plná penze v příjemném prostředí osvědčených hotelů.
Softwarová školení jsou vhodná pro všechny uživatele daného programu.
<h5>Nabízená softwarová školení:</h5>
<ul>
<li>👉 <a href="https://hpst.cz/masshunter-pro-gcms">MassHunter pro GC/MS</a></li>
<li>👉 <a href="https://hpst.cz/masshunter-pro-lcms-qqq">MassHunter pro LC/MS QQQ - Novinka</a></li>
<li>👉 <a href="https://hpst.cz/openlab-cds-2x-sw">OpenLAB CDS 2.x SW</a></li>
<li>👉 <a href="https://hpst.cz/openlab-cds-2x-sw-online-skoleni">OpenLAB CDS 2.x SW - On-line školení</a></li>
</ul>
<h3>Servisní tým</h3>
Servisní technici jsou specializovaní na konkrétní typy instrumentace. Jsou průběžně školeni ve školících centrech firmy Agilent Technologies a jsou oprávněni poskytovat servisní i kvalifikační služby na analytické přístroje Agilent Technologies, včetně vystavení kvalifikačních certifikátů o provedení preventivní údržby, ověření výkonnosti nebo kalibrace.
<h3>Kontakty:</h3>
👉 <a href="https://hpst.cz/servisni-tym">Servisní technici</a>
👉 <a href="https://hpst.cz/servisni-pozadavek">Servisní požadavek</a>
Horká linka servisu je dostupná v pracovní dny mezi 8:00 - 17:00, e-mail a servisní požadavek jsou k dispozici 24 hodin denně. 
<ul>
<li>Horká Linka servisu (po - pá): +420 725 631 863</li>
<li>Kontaktní e-mail: servis@hpst.cz</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_team_2021_40506f2338/HPST-team-2021.webp" alt="HPST team v roce 2021"/>

Instrumentace s přidanou hodnotou - silný servisní tým, pravidelná školení

Nenechte si ujít živé nadcházející online webináře od<a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://gcms.cz/products/1"> Agilent Technologies</a> zaměřené na LC, GC, LC/MS a GC/MS. Seznamte se s praktickými tipy a triky, které můžete okamžitě použít ve své laboratoři. Webináře jsou vždy od 17.00 hodin (CET). V případě, že nějaký nestihnete, jsou následně po registraci k dispozici ze záznamu.Neváhejte se registrovat!<h3>GC a GC/MS webináře</h3><h4>21. 11. 2024 PLOT TWIST: Using PLOT Columns for the Analysis of Gasses and Very Volatile Compounds</h4><div><div><ul><li><div>ZÁZNAM | Proběhlo Čt, 21.11.2024</div></li><li><div><a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://gcms.cz/webinar/4482">Registrace</a></div></li></ul></div>Budeme se zabývat principy separace na kolonách PLOT a probereme řadu aplikací včetně permanentních plynů, izomerů lehkých uhlovodíků, sloučenin síry a kyslíkatých látek.</div><h4>18.12.2024 An Overview of GC Column Selection for Traditional and New Methods for the Analysis of Fatty Acid Methyl Esters (FAMEs)</h4><div><div><ul><li><div>St, 18.12.2024 17:00 CET</div></li><li><div><a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://gcms.cz/webinar/4512">Registrace</a></div></li></ul></div>Budeme diskutovat o inovativních technologiích v chemii GC kolon, které lze použít pro rychlou a přesnou analýzu mastných kyselin a metylesterů mastných kyselin (FAME).</div><h4>21.1.2025 All About USP 467 Residual Solvent: Regulatory and Application Updates</h4><div><div><ul><li><div>Út, 21.1.2025 17:00 CET</div></li><li><div><a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://gcms.cz/webinar/4513">Registrace</a></div></li></ul></div>Nejnovější změny v USP 467, nejnovější trendy a aplikace v analýze zbytkových rozpouštědel spolu s analytickým pracovním postupem s cílem získat přesné a reprodukovatelné výsledky.</div><h4>4.2.2025 Peak Perfection: A Guide to GC troubleshooting</h4><ul><li>Út, 4.2.2025 17:00 CET</li><li><a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://gcms.cz/webinar/4514">Registrace</a></li></ul>Probereme některé z nejčastějších chromatografických problémů, se kterými se setkáváte při použití plynové chromatografie, a logicky se pokusíme najít hlavní příčinu a problém odstranit.<h4>25.3.2025 GC Method Development from Beginner to Expert</h4><div><div><ul><li><div>Út, 25.3.2025 17:00 CET</div></li><li><div><a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://gcms.cz/webinar/4515">Registrace</a></div></li></ul></div>Tato prezentace se bude zabývat sestavením GC metody. Probereme, co je třeba zvážit, kde začít a co optimalizovat.</div><h4>23.4.2025 Decoding Detectors: Advanced Insights into Gas Chromatography Detectors, Column Installation, Optimization and Troubleshooting</h4><div><div><ul><li><div>St, 23.4.2025 17:00 CET</div></li><li><div><a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://gcms.cz/webinar/4516">Registrace</a></div></li></ul></div>Budeme se zabývat různými typy detektorů, včetně FID, TCD, ECD a MS detektorů, a probereme jejich přednosti a použití.</div>

Živé online webináře od Agilent zaměřené na GC a GC/MS

<h3>Dělení v čase</h3>
Plynová chromatografie (GC) je jednou ze separačních technik, stejně jako destilace a podobně. Na rozdíl od nich, se ale zpravidla nevyužívá k fyzickému oddělení jednotlivých složek, ale slouží k separaci složek v čase.
Toho je docíleno tím, že odpařená směs (nebo směs plynů) je vedena do trubice (kolony) obsahující materiál (stacionární fázi), který zadržuje některé složky více než jiné. Dochází tak k oddělení složek v čase. Detekcí na výstupu je získán chromatogram (viz Obrázek 1), ve kterém každý pík reprezentuje jinou složku původní směsi.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Obrazek_1_Typicky_chromatogram_9d476e4c90/HPST-Obrazek-1-Typicky-chromatogram.jpg" alt="HPST: Obrázek 1 Typický chromatogram"/>
Každý chromatografický pík charakterizuje jeho retenční čas a velikost (výška nebo plocha).
<ul>
<li>Retenční čas je specifický pro různé látky a využívá se proto při identifikaci jednotlivých složek</li>
<li>Velikost píku potom odpovídá množství dané látky a dá se použít při kvantifikaci</li>
</ul>
<h3>Části chromatografického systému</h3>
Sestava pro plynovou chromatografii obsahuje:
<ul>
<li>Regulovaný zdroj čistého plynu (<a href="https://gcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=carrier+gas">nosný plyn</a>), který tlačí vzorek skrz plynový chromatograf</li>
<li><a href="https://gcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=inlet">Inlet</a>, kterým se dávkuje a ve kterém také dochází ke zplynění kapalných vzorků</li>
<li><a href="https://gcms.cz/library?instrumentationItems=19&amp;mainauthorItems=10&amp;search=column">Kolonu</a>, na které dochází k chromatografické separaci</li>
<li>Detektor, který reaguje na přítomnost látek na výstupu z kolony a odezvu převádí na elektrický signál</li>
<li>Řídící počítač a <a href="https://gcms.cz/products?category=8&amp;distributorItems=37&amp;manufacturerItems=10">software</a> pro sběr a vyhodnocení dat.</li>
</ul>
Schématicky je systém znázorněn na Obrázku 2.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Obrazek_2_Chromatograficky_system_d328498962/HPST-Obrazek-2-Chromatograficky-system.jpg" alt="HPST: Obrázek 2 Chromatografický systém"/>
<h5>Nosný plyn</h5>
V plynové chromatografii se využívá plyn jako základní médium, které unáší vzorek z inletu přes kolonu do detektoru. Nejčastěji se pro tyto účely používá:
<ul>
<li><a href="https://gcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=Helium+carrier+gas">helium</a></li>
<li><a href="https://gcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=Nitrogen+carrier+gas">dusík</a></li>
<li><a href="https://gcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=Hydrogen+carrier+gas">vodík</a></li>
<li>případně argon</li>
</ul>
Nosný plyn musí být čistý. I malá koncentrace nečistot může nežádoucím způsobem reagovat se vzorkem nebo kolonou. V praxi se to projeví například výskytem falešných píků, sníženou citlivostí nebo zvýšením šumu detektoru. V krajním případě může dojít i k nevratnému poškození přístroje. Proto je potřeba <a href="https://gcms.cz/products?category=97">používat plyny s vysokou čistotou</a>. Případně lze systém vybavit sorpčními trapy zachycujícími vlhkost, uhlovodíky a kyslík.
Typické zapojení je uvedeno na Obrázku 4.
V praxi se často používají kombinované trapy, které obsahují všechny tři sorbenty. U nich je vždy vyznačeno, jakým směrem se mají zapojit. Pokud jsou plyny přivedeny z centrálního rozvodu, je doporučeno umístit čisticí trapy co nejblíže k přístroji.
<blockquote>
<h4>17 edukativních GC webinářů Agilent Technologies zaměřených na základy a principy <a href="https://gcms.cz/webinars?search=agilent&amp;tags=36-1">v databázi LabRulezGCMS</a></h4>
</blockquote>
<blockquote>
<h5>Lab Productivity Series – GC Basic</h5>
</blockquote>
<blockquote>
<ul>
<li>Kritické části GC</li>
<li>Různé typy nástřiku a detektorů</li>
<li>Význam různých parametrů pro výběr GC kolon</li>
<li>Co je plynová chromatografie a typický chromatogram?</li>
<li>Techniky zavádění vzorků</li>
<li>Porovnání typů detektorů a jejich selektivity</li>
<li>Digitální možnosti zákaznické podpory na dálku</li>
</ul>
</blockquote>
<blockquote>
<h5>Lab Productivity Series – GC Advanced</h5>
</blockquote>
<blockquote>
<ul>
<li>Uživatelské odstraňování problémů a údržba GC</li>
<li>Tipy a triky pro zlepšení GC chromatografie</li>
<li>Úvahy o vzorku a jeho dávkování, které je třeba mít na paměti při vývoji GC metody</li>
<li>Selektivita kolon pro robustní metodu</li>
<li>Nosný plyn v GC</li>
<li>Vývoj teplotního programu a optimalizace metod</li>
<li>Řešení Agilent cross Lab pro celou Vaší firmu</li>
</ul>
</blockquote>
K nastavení tlaku nosného plynu je potřeba použít kvalitní dvoustupňový redukční ventil s kovovou membránou. Dvoustupňová regulace nejprve sníží tlak z lahve (až 350 bar) na zhruba 50 bar a následně ve druhém stupni dochází k poklesu tlaku na nastavenou hodnotu. Tímto mechanismem je zajištěna velice přesná a stabilní regulace výstupního tlaku. Oproti tomu jednostupňové regulační ventily snižují tlak z lahve přímo na nastavenou hodnotu. Vzhledem k velkému tlakovému spádu je taková regulace méně přesná, což může vést ke zvlnění základní linie detektoru a posunům retenčních časů.
Levné redukční ventily jsou zpravidla vybavené gumovou membránou, skrz kterou může difundovat kyslík a další nečistoty z okolí. Dramaticky se tím snižuje kvalita nosného plynu. Pro účely plynové chromatografie jsou takové ventily naprosto nevhodné.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Obrazek_4_Zdroj_nosneho_plynu_742a5f939a/HPST-Obrazek-4-Zdroj-nosneho-plynu.jpg" alt="HPST: Obrázek 4 Zdroj nosného plynu"/>
<h5>Inlet</h5>
Inlet je část plynového chromatografu, která slouží k přenesení zplyněného vzorku do proudu nosného plynu. Nejčastěji se k tomuto účelu používá nástřikový port případně dávkovací ventil.
<a href="https://gcms.cz/library?instrumentationItems=1&amp;mainauthorItems=10&amp;search=valves">Dávkovací ventily</a> využívají dávkovací smyčku, která se nejprve naplní vzorkem a následně se po přepnutí ventilu celý obsah vypláchne na kolonu. Pomocí ventilů lze dávkovat jak plyny, tak i kapaliny.
Nástřikovým portem můžeme přes septum pomocí stříkačky dávkovat plynné i kapalné vzorky. Za účelem rychlého zplynění je inlet zpravidla vyhříván. Základní princip dávkování je uveden na Obrázku 3. S různými technikami nástřiku a s tím spojeným technickým řešením se blíže seznámíme příště.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Obrazek_3_Schema_nastrikoveho_portu_a4b2d3a34b/HPST-Obrazek-3-Schema-nastrikoveho-portu.jpg" alt="HPST: Obrázek 3 Schéma nástřikového portu"/>
Všechny inlety však mají jedno společné. Abychom získali kvalitní výsledky je potřeba zajistit těsnost a čistotu nástřikového portu. V případě netěsnosti bude vzorek unikat ze systému a měření nebude opakovatelné. Navíc se skrz opotřebené septum nebo špatnou feruli do přístroje snadno dostane kyslík, který jsme složitě eliminovali pomocí kvalitních redukčních ventilů a čisticích trapů.
<h5>Kolona</h5>
Na chromatografické koloně dochází k separaci jednotlivých složek. Uživatelsky je možné do přístroje namontovat různé typy kolon a přístroj tak využít pro různé typy analýz.
Vzhledem k tomu, že dělení složek silně závisí na teplotě, jsou kolony instalovány v horkovzdušné peci s přesně regulovanou teplotou, viz Obrázek 5.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Obrazek_5_Kolona_v_peci_plynoveho_chromatografu_3abe3ee8fc/HPST-Obrazek-5-Kolona-v-peci-plynoveho-chromatografu.jpg" alt="HPST: Obrázek 5 Kolona v peci plynového chromatografu"/>
Nyní jen předesílám, že zejména za vyšších teplot dochází u řady kolon k nevratné degeneraci, která může být umocněna přítomností kyslíku a vody. Proto je potřeba, aby byla kolona pod stálým průtokem čistého nosného plynu.
<h5>Detektor</h5>
Proud nosného plynu, který obsahuje oddělené látky, je z kolony veden do detektoru. Existuje celá řada detektorů, které se vzájemně liší konstrukcí a principy na kterých fungují. Základní funkce je ale u všech stejná:
<ul>
<li>Pokud detektorem prochází čistý nosný plyn, je generován stabilní elektrický signál – základní linie.</li>
<li>Při průchodu sledovaných látek se elektrický signál změní – zaznamená se chromatografický pík.</li>
</ul>
Obecně je však potřeba mít napaměti, že většina detektorů obsahuje části ohřáté na vysokou teplotu. Pokud se za těchto podmínek dostanou do kontatku s kyslíkem, dochází k oxidaci jejich povrchu, což může vést k jejich poškození nebo trvalé změně vlastností. Proto je potřeba, aby byly během provozu detektory neustále promývány čistými provozními plyny.
<h3>Závěr</h3>
V úvodním dílu seriálu o plynové chromatografii jsme se seznámily se základními částmi chromatografického systému a ukázali si, jaký význam má čistota provozních plynů. 
Příště si povíme více o technikách nástřiku vzorku, představíme si faktory, které nástřik zásadním způsobem ovlivňují a seznámíme se s různými typy inletů. Pokud nechcete čekat na další článek, můžete se přihlásit na naše odborné semináře, kde se o plynové chromatografii dozvíte víc.
<ul>
<li><a href="https://gcms.cz/products/114">HPST GC školení - uživatelské dovednosti a diagnostika</a></li>
<li><a href="https://gcms.cz/products/115">HPST MS (single-quad/QQQ pro GC) školení - uživatelské dovednosti a diagnostika</a></li>
</ul>
<h3>Přehled literatury k základům a principům v plynové chromatografii od Agilent Technologies (<a href="https://gcms.cz/library?search=fundamentals&amp;mainauthorItems=10">ke stažení v knihovně LabRulezGCMS</a>)</h3>
<ul>
<li>Fundamentals of Gas Chromatography (Příručky | 2002)
</li>
<li>Mass Spectrometry Fundamentals –Theory (Prezentace | 2016)
</li>
<li>Fundamentals of Gas Chromatography: Theory and Hardware, Mass Spectrometry Fundamentals –Theory and Hardware (Prezentace | 2020)
</li>
<li>Fundamentals and Troubleshootingof the Split/Splitless Inlet (Prezentace | 2020)
</li>
<li>GC/MS Fundamentals: What are GC/SQ, TQ, and Q-TOF and When to Use Them? (Prezentace | 2019)
</li>
<li>Time-of-Flight Mass Spectrometry (Aplikace | 2004)
</li>
<li>Single Quad, Tandem Quad and QTOF Mass Spectrometers: What is Used and When? (Prezentace | 2019)
</li>
<li>GC Tips and Tricks - Your guide to integrated, intuitive GC intelligence (Příručky | 2022)
</li>
<li>Time-of-Flight Mass Spectrometry (Aplikace | 2004)
</li>
<li>Single Quad, Tandem Quad and QTOF Mass Spectrometers: What is Used and When? (Prezentace | 2019)
</li>
</ul>

TEORIE, PRAXE A ÚDRŽBA: GC – Plynová chromatografie – základy a principy

Nechte se inspirovat krátkými videi ze série GC Troubleshooting v <a href="https://gcms.cz/article/854">planové chromatografii</a> z produkce společnosti Agilent Technologies. Během několika málo minut tak zjistíte, jak snadno lze některým problémů předcházet či je efektivně řešit.
<h3>Instalace GC kolony</h3>
Správná instalace kolony je jednou z klíčových znalostí pro dosažení dobrého výkonu plynového chromatografu. V následujících 2 videích vás servisní technici Agilent provedou jednotlivými kroky potřebnými k správné instalaci a úpravě GC kolony.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Agilent_GC_Column_Installation_Part_1_GC_Troubleshooting_Series_1689b791bb/Agilent-GC-Column-Installation-Part-1-GC-Troubleshooting-Series.png" alt=""/>
<a href="https://www.youtube.com/watch?v=Nx1FzgwlCiE">VIDEO: Agilent GC Column Installation - Part 1 - GC Troubleshooting Series</a>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Agilent_GC_Column_Installation_Part_2_GC_Troubleshooting_Series_9d1a8191dd/Agilent-GC-Column-Installation-Part-2-GC-Troubleshooting-Series.png" alt=""/>
<a href="https://www.youtube.com/watch?v=YmkKikaakSI">VIDEO: Agilent GC Column Installation - Part 2 - GC Troubleshooting Series</a>
<h3>Výměna lineru, septa, splitovacího trapu a zlatho těsnění</h3>
Zjistěte, jak snadno lze vyměnit liner, septum a zlaté těsnění u Agilent 7890 GC. V posledním videu se dozvíte, že pro bezproblémový chod plynového chromatografu je vedle správné údržby inletu i nezbytná údržba/výměna splitovacího ventilu, kterou si ve videu ukážeme.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Agilent_Replacing_Your_Liner_Septum_and_O_Ring_GC_Troubleshooting_Series_42ca5fa200/Agilent-Replacing-Your-Liner-Septum-and-O-Ring-GC-Troubleshooting-Series.png" alt=""/>
<a href="https://www.youtube.com/watch?v=mExb2mj0eEk&amp;feature=youtu.be">VIDEO: Agilent Replacing Your Liner, Septum and O-Ring - GC Troubleshooting Series</a>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Agilent_Replacing_the_Gold_Seal_GC_Troubleshooting_Series_9430e824a3/Agilent-Replacing-the-Gold-Seal-GC-Troubleshooting-Series.png" alt=""/>
<a href="https://www.youtube.com/watch?v=uMTKMbmSvRI">VIDEO: Agilent Replacing the Gold Seal - GC Troubleshooting Series.</a>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Agilent_Change_the_Split_Vent_Trap_GC_Troubleshooting_Series_7eb3bbccfe/Agilent-Change-the-Split-Vent-Trap-GC-Troubleshooting-Series.png" alt=""/>
<a href="https://www.youtube.com/watch?v=vIoHnW5NKBE">VIDEO: Agilent Change the Split Vent Trap - GC Troubleshooting Series</a>
Nevíte si rady? Napište nám. Náš tým vyškolených a certifikovaných servisních techniků si s Vaším problémem poradí.
A nebo se přihlašte na naše HPST hardwarové GC a GCMS školení.
Servisní oddělení HPST pro Vás pravidelně organizuje hardwarová školení zaměřená na instrumentaci Agilent Technologies a důrazem na diagnostiku hardwarových problémů a údržbu systému.
<a href="https://gcms.cz/products/114">1. HPST GC školení - uživatelské dovednosti a diagnostika</a>
<a href="https://gcms.cz/products/115">2. HPST MS (single-quad/QQQ pro GC) školení - uživatelské dovednosti a diagnostika</a>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/application::product.product/HPST-skoleni-1.jpg" alt="HPST GC a MS (single-quad/QQQ pro GC) školení"/>
<h3>Literatura a Webináře údržba a řešení problémů v plynové chromatografii</h3>
<a href="https://gcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=troubleshooting%20maintainance">V Knihovně LabRulezGCMS</a> naleznete několik stovek příruček, prezentacá nebo technických článků s podrobným popisem řešení nejčastějších i těch méně častých problému nebo údržby v plynové chromatografii.
<a href="https://gcms.cz/webinars?companyId=37">V sekci Webináře</a> od Agilent Technologies a HPST naleznete desítky užitečných záznamů přednášek nejen k troubleshootingu nebo údržbě Vašich GC a GCMS systému.

Údržba Vašeho GC - série videí od Agilent Technologies

V tomto případě je plocha píku analytu nacházející se za časem retenčního maxima větší než plocha píku analytu před časem retenčního maxima. Symetrii píku definuje faktor As*, který je v případě chvostujících píků větší než 1.2. A*s je poměrem b ku a, kdy b je šířkou píku v 10 % jeho výšky za retenčním časem maxima a a je šířkou píku v 10 % jeho výšky před retenčním časem maxima.**
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Asymetrie_chromatografickeho_piku_f044130a94/Asymetrie-chromatografickeho-piku..png" alt="Asymetrie chromatografického píku."/>
<h3>Kdy dochází k tomuto jevu a co je jeho příčinou?</h3>
Odpovědí na tuto otázku může být více. Prvním místem, na které byste se na chromatografu měli zaměřit, je inlet a jeho pravidelná údržba. Nejběžnější příčiny chvostujících píku se totiž často skrývají právě zde.
Pakliže jsou píky zprvu symetrické a s každým dalším nástřikem vzorku se jejich tvar zhoršuje, jedná se o klasický příklad nástřiku znečištěného vzorku.
Při nástřiku jednoho či několika obzvláště špinavých vzorků se jev může vyskytnout i ve velmi krátkém čase v rozptylu několika analýz. Původcem jsou netěkavé látky hromadící se na koloně v průběhu měření, které následně mohou způsobit, jak posun retenčních časů, tak chvostování píků. Znečištění mohou působit i částečně těkavé látky, které v průběhu separace zkondenzují na koloně. Vzhledem k částečnému odparu a neustálému posunu systémem s každým dalším nástřikem mohou postupně pokrýt celou kolonu.
Stěžejním bodem prevence znečištění cesty vzorku je pravidelná údržba inletu a zkracování kolony. Většina nečistot se z povahy své netěkavosti hromadí hned zkraje kolony. Pravidelné seřezávání kolony o zhruba 20 cm jednoduše odstraní z cesty vzorku znečištěný úsek a často odstraní veškerý vliv nečistot na kvalitu výstupu chromatografu.
Řešením může být i proplach kolony rozpouštědlem, nicméně většina laboratoří si tuto údržbu nemůže dovolit vzhledem k vyšší časové náročnosti.
Nejúčinnější prevencí je pochopitelně vůbec nedopustit nástřik netěkavých nečistot do systému. Vhodně zvolená extrakce, či přečištění vzorku jsou prostředky, se kterými lze v tomto ohledu docílit znatelných výsledků. Pokud máte prostor, vybavení a zkušenosti pro optimalizaci přípravy vzorku před každým nástřikem (mikroextrakce na tuhé fázi, headspace nástřik, filtrace nečistot), určitě se tento krok projeví prodloužením životnosti vaší kolony. (<a href="https://www.labicom.cz/produkty/spotrebni-material/plynova-chromatografie-prislusenstvi/gc-kolony-predkolony/agilent">Přehled kolon od Agilent Technologies</a>) 
Další variantou je začlenění tzv. retenčního gapu neboli předkolony mezi inlet a vlastní kolonu. Retenční gap je vlastně alternativou neustálého zkracování analytické kolony. Místo kroku seříznutí vlastní kolony, tak při zhoršení symetrie píků, nebo posunu retenčních časů, jednoduše vyměníte pouze retenční gap. Výhodou je, že s tímto řešením nezasáhnete do jednoho z klíčových parametrů separace, kterým je délka kolony. Při zkracování vlastní kolony tak neustále činíte a vystavujete se následně nutnosti přizpůsobení ostatních parametrů separace (teplota, průtok apod.).
Nečistoty lze zachytit i v prostoru inletu. Docílíte tak například s využitím lineru se skelnou vatou ve spodní části. Efekt skelné vaty lze vidět na obrázku. Nečistoty jsou zachyceny ve skelné vatě a nevstupují dále do systému. Bohužel tento prvek zachytí pouze netěkavé nečistoty, ty částečně těkavé prostupují vzhledem k neustálému částečnému odparu na kolonu. Odstranění částečně těkavých látek docílíme pouze vypálením kolon.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Linery_se_skelnou_vatou_b6df89a7ab/Linery-se-skelnou-vatou..jpg" alt="Linery se skelnou vatou."/>
Vypálení kolony je vlastně jen pouhé zahřátí systému na 1-2 hodiny k teplotnímu limitu dané kolony. Takto by mělo dojít k uvolnění a průchodu většiny částečně těkavých látek ven ze systému.
Příčina znečištění se může dále nacházet kdekoliv v prostoru injektoru. Udává se, že tato část systému je příčinou zhoršení kvality výstupu až v 90 % případů. Pravidelná údržba nástřikových prostor by měla zahrnovat výměnu špinavého lineru, vyčištění všech ostatních prostor injektoru, výměnu zlatého těsnění i výměnu septa. (<a href="https://gcms.cz/article/873">Podívejte se na videa věnující se správné instalaci kolon, výměně lineru, septa, splitovacího trapu a zlatého těsnění</a>)
Pokud jste provedli vše zmíněné a stále pozorujete na výstupu z detektoru chvostující píky, může se jednat o důsledek pozměněné aktivity na koloně. K tomuto jevu dochází, pokud analyzujete látky, které chemicky interagují se stacionární fázi kolony. Pozměněné vlastnosti kolony na jejím začátku lze opět odstranit jejím zkrácením. Postup popisuje aplikační specialista Daron Decker v čase 2:45.
Předně přerušíte veškeré analýzy a počkáte, než prostředí pece a inletu zchladnou na běžnou teplotu. Následně uvolníte kolonu z inletu (pozor na neposedné ferulky) a pustíte se do toho. Kolonu uchopíte do jedné ruky a do druhé si vezmete keramický metr s řeznou hranou (cokoliv jiného s ostrou hranou). Keramický metr má dva okraje, hrubý a hladký. Hladkým okrajem lehce kolmo přejedete přes místo, ve kterém chcete kolonu zkrátit. Principem pohybu je narušit svrchní polyimidovou vrstvu, zajišťující ohebnost kolony, a vnitřního skleněného jádra se pouze dotknout. Kolonu byste neměli tímto pohybem ještě zcela zlomit. Následně jen lehce zatlačíte na oddělený konec a kolona by se měla ochotně zlomit. Tímto postupem se snažíte zajistit co nejsouměrnější zlom celým průměrem kolony. Hladký zlom je následně důležitý pro vstup vzorku na kolonu. Čistý řez tohoto konce zkracuje úsek kolony, čas, v němž je vzorek nanesen na kolonu, což přispívá rozlišení systému.
Pokud se aktivovaná pasáž kolony nachází ve vzdálenějších částech, její zkracování nepomáhá, bohužel se jedná o nevratné poškození stacionární fáze a řešením je pouze instalace nové kolony.
Při časté analýze aktivních látek je doporučováno používat <a href="https://gcms.cz/products/171">ultra inertních kolon</a>. Tyto kolony jsou tvořeny speciálně inertizovanými stacionárními fázemi a cíleny právě pro analýzy chemicky aktivních analytů. Stárnutím mohou i tyto podlehnout chemickému působení některých agresivních analytů, ale jejich odolnost je větší a životnost delší.
Některé agresivní, velmi reaktivní analyty budou vždy vytvářet chvostující píky a tuto asymetrii nikdy zcela neodstraníte ani s použitím ultra inertních kolon. 
K optimalizaci může občas ještě přispět pasivace kolony. Jedná se o několikanásobné promytí kolony vysokými koncentracemi aktivního analytu, který pokryje většinu reaktivních míst stacionární fáze a během následné analýzy samotných vzorků je tak zajištěna její jednotná afinita. Pasivace je vždy pojena s konkrétním analytem. Její kladný efekt na symetrii píků bývá však často jen nepatrný.
Příčina chvostování píků může tkvět i v nerovnoměrnosti průchodu vzorku systémem. Jako příklady mohou sloužit nadměrný mrtvý objem systému, špatná instalace kolony, různé obstrukce toku nosného plynu, nebo třeba opět výrazná kontaminace kolony. Tyto příčiny pozměňují proudění vzorku systémem a prostorově narušují jeho rovnoměrnou separaci. Ověřit lze nástřikem analytu, o kterém víte, že je zcela inertní ke stacionární fázi kolony a převážně těkavý čili během separace stráví většinu času v mobilní fázi. Za normálních okolností tak vždy tvoří symetrické píky. Za tímto účelem se nejčastěji používají metan či butan. Pokud vám píky těchto plynů chvostují, pak víte, že máte v systému co do činění s obstrukci toku vzorku.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Nastrik_zcela_inertniho_analytu_ke_stacionarni_fazi_kolony_75aadbe7cf/Nastrik-zcela-inertniho-analytu-ke-stacionarni-fazi-kolony..jpg" alt="Nástřik zcela inertního analytu ke stacionární fázi kolony."/>
Jak již bylo zmíněno, důležitým předpokladem symetrických píků je správně nainstalovaná kolona. Chyby při instalaci mohou vést ke vzniku turbulentního proudění kolonou, nerovnoměrné separaci složek vzorku a obvykle deformaci tvaru píků v podobě chvostování. Při instalaci je tedy důležité seříznout kolonu čistým řezem, vsunout do inletu či detektoru vhodnou délku kolony a zajistit veškeré spoje proti netěsnostem. Vsunutím kolony příliš hluboko do prostoru inletu zbytečně rozšiřujeme mrtvý objem systému, vsunutím nedostatečně hluboko zase konec zůstane v kontaktu se zlatým těsněním, u jehož ústí se vyskytuje turbulentní proudění, jehož charakter se následně promítá i do průtoku vzorku kolonou a zabraňuje rovnoměrné separaci. Na straně inletu se doporučuje délka přesahu 4-6 mm nad ferulkou. Na detektorovém konci se vhodný přesah liší, ale obecně se doporučuje opatrně vsunout konec až kam prostor dovolí a následně pouze drobně povytáhnout zpět (pocitově, 1-2 mm).
<h3>Nepřehlédněte</h3>
Přehled kolon od Agilent Technologies <a href="https://www.labicom.cz/produkty/spotrebni-material/plynova-chromatografie-prislusenstvi/gc-kolony-predkolony/agilent">zde</a>.
Přehled videí věnující se údržbě Vašeho GC (instalace GC kolony, výměna lineru, septa, splitovacího trapu a zlatého těsnění) od Agilent Technologies naleznete v článku <a href="https://gcms.cz/article/873">Údržba Vašeho GC - série videí od Agilent Technologies</a>
Nevíte si rady? Servisní oddělení HPST pravidelně organizuje <a href="https://hpst.cz/skoleni/analyticka-chemie-hardwarova-skoleni">hardwarová školení zaměřená na instrumentaci Agilent Technologies</a> s důrazem na diagnostiku hardwarových problémů a údržbu systému.
Přehled hardwarových a softwarových školení servisního a aplikačního oddělení HPST naleznete také v <a href="https://gcms.cz/products?category=36&amp;distributorItems=37">sekci Produkty</a>.

Údržba Vašeho GC. Chvostující píky.

Webináře

Aplikace

Akademie

Osobnosti

Plasty

Životní prostředí

Potraviny

Vody

Zdraví

Přednáška

Vědecký článek

Rozhovor

Toxikologie

Popularizace

Věda a výzkum

Software

Covid-19

Kariéra

Článek

Laboratoře

Různé

Produkt

Video

Poster

Nejbližší akce

Typ novinky

Zaměření

Je autorizovaným distributorem společnosti Agilent Technologies pro Českou republiku v oblastech chromatografie (GC, HPLC, UHPLC, kapilární elektroforéza) a hmotnostní spektrometrie (GC/MS, LC/MS, CE/MS), disolučních aparátů, molekulární (UV-Vis, UV-Vis-NIR, fluorescence, FTIR analyzátory a mikroskopy) a atomové spektroskopie (ICP-OES, ICP-MS, AAS), a v neposlední řadě také v oblasti molekulární biologie a genomiky (analýza nukleových kyselin a proteinů, microarray skenery a skla, PCR & RT-PCR, qPCR, řešení pro NGS, reagencie pro mutagenezi a klonování, sondy FISH a další).

Altium International

Shimadzu at ISC 2026

DataApex at ISC 2026

Představení přístroje Revo od společnosti Nicoya

ICP-MS for Hybrid Photoelectrode Characterization

Addressing LC Method Optimization - Scaling For Efficiency, Throughput And Reproducibility

Proteoform Studio software, top down made simple