Supercritical Fluid Chromatography with Flexible Injection Volumes at Highest Precision

Význam tématu

Superkritická fluidní chromatografie (SFC) nabízí rychlé a ekologické oddělení látek s využitím CO₂ jako hlavní mobilní fáze. Přesné dávkování vzorku je klíčové pro opakovatelnost a linearitu analýz, zejména v prostředích, kde dochází k odpařování mobilní fáze při atmosférickém tlaku.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo zhodnotit novou metodu flexibilní injekce ve SFC pomocí Agilent 1260 Infinity II SFC Multisampler. Studie porovnávala tradiční pevné smyčky s technologií feed-injection, která umožňuje variabilní objemy s velmi vysokou přesností.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda vychází z principu nasátí vzorku za atmosférického tlaku, jeho přepuštění do smyčky pod tlakem systému a ultrarychlé injekce do proudu CO₂. Proces zahrnuje:

• Čištění smyčky a jehly methanolem před odběrem.
• Nasátí přesného objemu vzorku (0,1–80 µL).
• Přetlakování smyčky systémovým tlakem.
• Ultrarýchlou injekci s nastavitelnou rychlostí podávání (feed speed).
• Možnost předefinovat objem přepadu (over-feed) pro úplné vyprázdnění smyčky.

Instrumentace:

• Agilent 1260 Infinity II SFC Control Module
• Agilent 1260 Infinity II SFC Binary Pump
• Agilent 1260 Infinity II SFC Multisampler
• Agilent 1260 Infinity II DAD se SFC průtokovou kyvetou
• Sloupec Agilent ZORBAX Rx-Sil (4,6×150 mm, 5 µm)
• Software Agilent OpenLAB CDS ChemStation

Vzorky: roztoky kofeinu a theobrominu v methanolu.

Hlavní výsledky a diskuse

Studie potvrdila vynikající linearitu injekce v rozsahu 0,1–10 µL (R² > 0,9995) pro izokratické i gradientní podmínky. Reprodukovatelnost (RSD) byla pro objemy nad 0,5 µL pod 0,3 % a i pro 0,1 µL nepřesahovala 3 %. Pro velké objemy (10–80 µL) byla dosažena výborná linearita (R² = 0,9999) a RSD typicky ≤ 0,3 %. Přenos vzorku mezi injekcemi byl minimální (carryover 14 ppm).

Přínosy a praktické využití metody

• Flexibilní nastavení injekčních objemů bez nutnosti ztrát vzorku.
• Vysoká přesnost a linearita napříč širokým rozsahem objemů.
• Minimalizace přenosu kontaminant mezi analýzami.
• Zvýšení robustnosti a efektivity v rutin­ní laboratorní praxi (farmacie, potravinářství, environmentalistiky).

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozvoj v automatizaci feed-injection pro vícekanálové systémy, integrace se hmotnostní spektrometrií pro selektivní detekci a optimalizace metod pro náročné matricové vzorky. Zároveň lze očekávat využití v online monitoringových aplikacích a v mikroproudo­vých platformách.

Závěr

Agilent 1260 Infinity II SFC Multisampler s technologií feed-injection představuje flexibilní a vysoce přesnou alternativu k pevným smyčkám. Umožňuje širokou škálu injekčních objemů s minimálními ztrátami vzorku, vynikající linearitou a reprodukovatelností.

Reference

1. Naegele E. Feed Speed and Over-Feed Volume – New Parameters for SFC Injection. Agilent Technologies Technical Overview 5991-7626EN, 2017.