Improved LC/MS/MS Pesticide Multiresidue Analysis Using Triggered MRM and Online Dilution

Význam tématu

Pesticidní multireziduální analýzy jsou klíčové pro sledování reziduí až stovek látek v potravinách a krmivech. Rychlé a citlivé metody umožňují splnit regulatorní požadavky a zajistit bezpečnost spotřebitelů. Kombinace LC/MS/MS s pokročilými přístupy k akvizici dat minimalizuje riziko falešně pozitivních či negativních výsledků a zvyšuje efektivitu rutinního testování.

Cíle a přehled studie / článku

Popis vývoje a validace LC/MS/MS metody pro simultánní stanovení ~450 globálně významných pesticidů za méně než 10 minut separace. Metoda využívá Agilent 1290 Infinity II LC spřažený s Agilent 6490 QqQ a implementuje triggered MRM (tMRM) spolu s online ředěním vzorku pro zlepšení tvaru raných piků.

Použitá instrumentace

• Kapalinový chromatograf Agilent 1290 Infinity II (1 200 bar)
• Triple kvadrupólový hmotnostní spektrometr Agilent 6490 QqQ s AJS ESI
• Online ředicí modul složený ze dvou vysokotlakých mixerů a volitelné čtyřcestné pumpy
• Analytický sloupec Agilent ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18 (2,1×100 mm, 1,8 µm)
• Software Agilent MassHunter pro akvizici a zpracování dat

Použitá metodika

Vzorky se extrahují podle modifikované QuEChERS procedury v acetonitrilu s 1 % kyseliny octové, bez post-extrakčního naředění. Do extraktu se vnáší interní standard a provádí se on-line ředění směsí silně vodného a organického mobilního fáze před sloupcem. Chromatografický gradient trvá 14,8 minuty, injekční objem 2 µL. MS/MS akvizice využívá tMRM: zpravidla 2–3 primární MRMs a dalších 2–4 trigrovaných MRM přechodů na analyty, cyklus 650 ms, dwell time >5 ms.

Hlavní výsledky a diskuse

Optimalizace chromatografie a tMRM akvizice umožnila rovnoměrné rozložení MRMs po celém běhu a ostré, soustředěné píky raně elujících polárních pesticidů. Metoda byla úspěšně převedena a validována ve třech laboratořích dle SANTE/11945/2015 s LOQ 0,01 mg/kg ve většině matic. tMRM výrazně zlepšuje jistotu identifikace a snižuje riziko falešných pozitiv i negativ, což ilustrují příklady v botanických extraktech.

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoká průchodnost až ~450 pesticidů za jeden běh
• Krátký čas analýzy (<10 min) šetří náklady a zvyšuje kapacitu
• On-line ředění zajišťuje kvalitní píkový tvar raně elujících polárních složek
• tMRM poskytuje dodatečná data k potvrzení a rychlejšímu vyhodnocení podezřelých signálů
• Jednoduchá příprava vzorku bez nutnosti pre-ředění

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozšíření databází tMRM knihoven, integrace s vysokorozlišovacími MS, plná automatizace přípravy a zpracování dat, miniaturizace spotřeby rozpouštědel a posílení modulů pro data mining. Kombinace více analytických platforem a pokročilých bioinformatických nástrojů povede k dalšímu zefektivnění monitoringu reziduí.

Závěr

Vyvinutá LC/MS/MS metoda s triggered MRM a online ředěním nabízí robustní, rychlý a vysoce výkonný nástroj pro multireziduální stanovení pesticidů v potravinách. Validace v několika laboratořích potvrdila vysokou přesnost, opakovatelnost a spolehlivou identifikaci ve složitých maticích.

Reference

• European Commission (2016) SANTE/11945/2015 Guidance on analytical quality control and method validation procedures for pesticide residue analysis in food and feed.
• Agilent Technologies (2013) Triggered MRM: Simultaneous Quantitation and Confirmation Using Agilent Triple Quadrupole LC/MS Systems, Tech. Overview 5990-8461EN.
• Glauner T. et al. (2012) Application of Triggered MRM Database and Library for Quantitation and Identification of Pesticides in Food Extracts, Agilent App. Note 5991-1183EN.
• AOAC INTERNATIONAL (2007) Official Method 2007.01, Pesticide Residues in Foods by Acetonitrile Extraction and Partition with MgSO4.
• Agilent Technologies (2014) MassHunter Optimizer User Manual, G3793-90008.
• Mastovska K. et al. (2017) Triggered MRM LC/MS/MS Method Development: Practical Considerations, Tech. Overview 5991-7195EN.
• Agilent Technologies (2017) Validation Results for LC/MS/MS Pesticide Multiresidue Analysis Using Triggered MRM and Online Dilution, Supplementary Info 5991-7194EN.