Agilent BioHPLC Columns - Your essential resource for biomolecule analysis

Význam tématu

Biomolekulární analytika je klíčová v biotechnologickém i farmaceutickém výzkumu, kde přesná a reprodukovatelná separace bílkovin, peptidů, oligonukleotidů a glykanů urychluje vývoj bioléčiv a zajišťuje jejich kvalitu. Moderní HPLC kolony s optimalizovanou morfologií náplně a speciálními povrchovými úpravami minimalizují sekundární interakce a umožňují citlivou detekci molekul širokého molárního hmotnostního rozsahu.

Cíle a přehled studie / článku

Publikace shrnuje kompletní nabídku Agilent BioHPLC kolon a souvisejících metod pro:

• reverzní fáze a peptide mapping
• iontově-výměnnou chromatografii pro rozlišení izoform
• velikostní vylučování (SEC) pro stanovení agregátů
• hydrofobní interakci (HIC) pro intact montoring
• hydrofilní interakci (HILIC) pro analýzu O-glykanů a glykopeptidů
• affinitní metody pro stanovení titru a odstranění vysoce hojných bílkovin

Použitá metodika a instrumentace

Pro každou aplikační oblast jsou navrženy specifické kolonové technologie a optimalizované podmínky:

• Poroshell a superficially porous částice pro zvýšení rychlosti a účinnosti separací při nízkém tlaku (600–1200 bar)
• polymerové PLRP-S a Bio IEX částice pro široké pH a chemickou odolnost
• monolitické Bio-Monolith kolony pro iontovou výměnu a proteomiku v režimu vysokého průtoku
• nové generace 1260 Infinity II bio-inert a 1290 Infinity II UHPLC systémů pro metal-free cestu vzorku a vysokou citlivost

Hlavní výsledky a diskuse

Kvalitativní a kvantitativní parametry pro jednotlivé kolonové formáty přinášejí:

• rychlé separace intact mAb za méně než 2 minuty (AdvanceBio RP-mAb C4, C8)
• vysoce rozlišené mapy peptidů v časech do 14 minut (AdvanceBio Peptide Mapping)
• optimalizované stanovení antigen-antibody titru v reálném čase pomocí Bio-Monolith Protein A
• spolehlivé stanovení agregátů dimery/monomery s Bio SEC-3/5 a AdvanceBio SEC
• ultra rychlou analýzu N-glykanů do 10 minut se stabilitou do 1200 barů (AdvanceBio Glycan Mapping)

Přínosy a praktické využití metody

Implementace Agilent BioHPLC řešení zlepšuje workflow:

• významné zkrácení doby metody a vyšší průchodnost vzorků
• vyšší rozlišení a přesnost kvantifikace kritických kvalitativních atributů
• minimalizace reanalýz díky stabilním materiálům a testovaným standardům
• snadná reprodukovatelnost a přenositelnost metod v rámci laboratoří a mezi zařízeními

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozvíjející se oblasti:

• vysoce rozlišená dvourozměrná LC pro komplexní proteomiku
• mikro a nano HC-LC separace pro single-cell analýzy
• integrované 2D-HILIC×RP metody pro detailní charakterizaci glykovariací
• pokročilá HPLC-MS/MS platforma pro multiplexní stanovení PTM a metabolit

Závěr

Agilent BioHPLC kolony, společně se špičkovými UHPLC systémy, představují komplexní, standardizované a výkonné nástroje pro analytickou chemii biomolekul. Nabízejí flexibilitu, rychlost a spolehlivost pro celou řadu aplikací od vývoje až po konečnou výrobní kontrolu bioléčiv.

Reference

• Agilent Technologies: AdvanceBio Columns Portfolio Brochure, publikace Agilent