Analysis of Impurities in Pharmaceutical Ingredients Using Trap-Free Two-Dimensional HPLC and Triple Quadrupole LC/MS/MS (LCMS-8040)

Význam tématu

Analýza stopových nečistot ve farmaceutických surovinách je klíčová pro zajištění kvality, bezpečnosti a účinnosti léčiv. Kombinace chromatografických a hmotnostně spektrometrických metod umožňuje citlivé stanovení a identifikaci nečistot.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo ukázat využití bezzamkového dvoudimenzionálního HPLC s online přepínáním na kompatibilní mobilní fázi pro přímé napojení na LC/MS/MS (LCMS-8040) při zachování nevolatilních podmínek farmakopejní metody.

Použitá metodika a instrumentace

• 1. dimenze: konvenční HPLC dle Japonské farmakopeje s mobilní fází methanol/fosfátový pufr (3/2) a UV detekcí při 290 nm.
• 2. dimenze: trap-free 2D-HPLC se zachycením frakcí v smyčce a přepnutím na methanol/amoniakální pufr (5 mmol/l amonný acetát) pro LC/MS analýzu.
• Instrumentace: Shimadzu LCMS-8040 triple quadrupole hmotnostní spektrometr spojený s dvoudimenzionálním HPLC systémem (Shim-pack VP-ODS a Shim-pack XR-ODS kolony).

Hlavní výsledky a diskuse

Ve vzorku 1 mg/ml rabeprazol sodného byly detekovány čtyři nečistoty označené uk1–uk4 v okolí eluce hlavní látky (5,3 min). Obsahy nečistot se pohybovaly od 0,023 % (uk3) do 0,433 % (uk1). Pomocí Q3 skenu byla určena molekulová hmotnost každé nečistoty a srovnáním fragmentačních vzorů hlavní složky a uk1 byl prokázán rozdíl 16 Da, což umožnilo navrhnout strukturu uk1.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda zachovává původní farmakopejní chromatografické podmínky bez nutnosti modifikace nevolatilních mobilních fází a současně poskytuje vysokou citlivost a selektivitu LC/MS/MS analýzy. Online přepínání mezi dimenzemi zrychluje workflow a umožňuje přesné sledování i nízkokoncentrovaných nečistot.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se širší uplatnění bezzamkových 2D-HPLC systémů v oblasti kontroly kvality, integrace s vysokorozlišovacími hmotnostními spektrometry, plná automatizace procesů a rozšíření aplikací do komplexních matric mimo farmaceutika, například v potravinářství či environmentální analýze.

Závěr

Kombinace trap-free dvoudimenzionálního HPLC a LC/MS/MS poskytuje robustní, citlivý a flexibilní nástroj pro identifikaci a kvantifikaci stopových nečistot ve farmaceutických přípravcích při zachování platných farmakopejních metod.

Reference

• Shimadzu Corporation. LAAN-A-LM-E068 Application News, First Edition, December 2014.