Injection of Highly Concentrated Samples Using an Agilent 1290 Infinity II Preparative LC System with Independent Flow Channels

Význam tématu

V preparativní chromatografii je snaha maximalizovat dávku vzorku na jednu analýzu nezbytná pro zvýšení produktivity. Omezujícím faktorem bývá rozpustnost vzorku ve vodných fázích, což vede k precipitaci a riziku ucpání autosampléru. Technika vstřikování vzorku v organické fázi usnadňuje práci s vysoce koncentrovanými roztoky a minimalizuje prostoje způsobené údržbou.

Cíle a přehled studie

Cílem přehledu je demonstrovat přestavbu Agilent 1290 Infinity II Preparative LC systému s nezávislými pumpami a separátními tlakovými okruhy pro fáze A a B. Metoda organického vstřikování umožňuje vstřik pouze organické fáze a následné smíchání s vodnou fází těsně před kolonkou, čímž se eliminuje precipitace.

Použitá metodika a instrumentace

• Agilent 1290 Infinity II Preparative Binary Pump s nezávislými kanály
• Agilent 1260 Infinity II Preparative Autosampler s multidraw loop setem
• Agilent 1260 Column Organizer a Variable Wavelength Detector s celou buněčnou šířkou 0,3 mm
• Agilent 1290 Infinity II Preparative Open-Bed Fraction Collector
• Kolonka Agilent Prep-C18 30 × 50 mm, 5 µm, objem stacionární fáze přibližně 21 g
• Organická fáze vstřikována samostatným kanálem B, vodná fáze přiváděna kanálem A do T-spojky před kolonkou
• Gradientní eluce od 10 do 80 % acetonitrilu v průběhu 12 min, průtok 42 mL/min
• Vzorky (kofein, ethylparaben, biphenyl, phenanthren, pyren) rozpuštěné v DMSO až do 25 až 250 mg/mL

Hlavní výsledky a diskuse

Organické vstřikování umožnilo aplikovat dávku 522 mg vzorku (2,5 % hmotnosti stacionární fáze) bez precipitace a ucpání. U pěti různých sloučenin byla dosažena vynikající opakovatelnost retenčních časů (RSD ≤ 0,07 %) navzdory částečnému přetížení kolonky. Frakční sběr řízený UV detekcí 274 nm s prahem 30 mAU vedl k čistotě frakcí nad 99 % a výtěžnosti nad 91 %.

Přínosy a praktické využití metody

• Výrazné zvýšení hmotnostního zatížení kolonky při zachování rozlišení
• Minimalizace rizika precipitace a ucpání autosampléru
• Zkrácení doby údržby a zvýšení provozní dostupnosti systému

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace at-column dilution s organickým vstřikem pro další zvýšení dávky
• Optimalizace komponent pro menší vnitřní průměry kapilár a kolonek
• Propojení s preparativní hmotnostní spektrometrií pro cílené frakční sběry

Závěr

Organické vstřikování vzorku v připraveném Agilent 1290 Infinity II systému je efektivní technika pro práci s vysoce koncentrovanými roztoky. Umožňuje překročit tradiční omezení rozpustnosti, zvýšit zatížení kolonky a zkrátit prostoje způsobené precipitací.

Reference

1. Wheat TE Phoebe CH Neue UD Mass-directed Autopurification Optimization of Separation and Detection Chemistry 48th ASMS Conference on Mass Spectrometry and Allied Topics Jun 11–15 2000
2. Blom KF Two-Pump at-Column-Dilution Configuration for Preparative Liquid Chromatography-Mass Spectrometry Journal of Combinatorial Chemistry 2002 4(4) 295–301
3. Neue UD et al At-column Dilution for Improved Loading in Preparative Chromatography Chromatographia 2003 57(1) S121–S127