Quick and Routine Research Quantification of Melatonin in Plasma with the Agilent Ultivo LC/TQ

Význam tématu

Melatonin je endogenní hormon s klíčovou rolí v regulaci cirkadiánního rytmu a spánku. Jeho přesné stanovení v nízkých koncentracích v komplexních biologických matricích je zásadní pro farmakokinetické studie a monitorování produkce melatoninu u pacientů s poruchami spánku.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a optimalizovat rychlou a citlivou metodu pro kvantifikaci melatoninu v lidské plazmě s dosažením dolní hranice kvantifikace 10 pg/mL při minimální přípravě vzorku.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda je založena na vysokotlaké kapalné chromatografii Agilent 1260 Infinity II Prime spojené s trojitým kvadrupólem Ultivo LC/TQ a ESI ionizačním zdrojem. Vzorky byly připraveny jednoduchou proteinovou precipitací s acetonitrilem, zaschnutím vakuu a resuspendováním v methanolu. Chromatografie je provedena na koloně Poroshell 120 EC-C18 (2,1×50 mm) při 35 °C za gradientu formiátu amonného a fluoridu amonného s formiovou kyselinou.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosahuje lineární odezvy v rozmezí 10 pg/mL až 100 ng/mL (R2 = 0,998) s přesností 95–105 % a opakovatelností < 10 % RSD. Mezná detekce je 5 pg/mL v extraktu (odpovídá 10 pg/mL v plazmě). Průměrná procentuální výtěžnost extrakce MEL-D4 byla 95 ± 6 %. Endogenní melatonin v referenčním plazmovém standardu NIST SRM 1950 byl stanoven na 40,8 ± 3,0 pg/mL (RSD 7,3 %).

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá analýza (6,5 min) s minimální přípravou vzorku.
• Vysoká citlivost pro detekci nízkých endogenních hladin melatoninu.
• Ekonomické řešení vhodné pro výzkum i rutinní QA/QC analýzy.

Budoucí trendy a možnosti využití

Metodu lze rozšířit na multiplexní stanovení dalších hormonů a biomarkerů spánkových poruch. Další potenciál spočívá v aplikaci v personalizované medicíně, monitorování farmakoterapie a studiích cirkadiánních rytmů.

Závěr

Optimalizovaná LC-MS/MS metoda s Agilent Ultivo LC/TQ prokazuje vysokou citlivost, přesnost a spolehlivost při kvantifikaci melatoninu v lidské plazmě s minimální přípravou vzorku a krátkou dobou analýzy.

Použitá instrumentace

• Agilent 1260 Infinity II Prime LC systém
• Agilent Ultivo trojitý kvadrupól LC/MS
• Agilent ESI ionizační zdroj
• Kolona Poroshell 120 EC-C18, 2,1 × 50 mm, 1,9 µm

Reference

• Sartain M. Application Note 5994-0533EN, Agilent Technologies, 2019