A Sensitive Detection Technique for Analysis of Lipids in Liposomal Formulations Using an Agilent 1290 Infinity II ELSD

Význam tématu

Lipidy jsou klíčové složky liposomálních formulací používaných jako nosiče léčiv a vakcín. Správná kvantifikace jednotlivých lipidů je nezbytná pro kontrolu stability a uvolňování léčiva, protože ovlivňuje farmakokinetiku i farmakodynamiku finálního přípravku. Díky absenci UV chromoforů je evaporativní detekce světelným rozptylem (ELSD) ideální metodou pro analýzu těchto nenasycených a nebarevých molekul.

Cíle a přehled studie

Cílem Application Note bylo ověřit citlivost a opakovatelnost Agilent 1290 Infinity II ELSD při stanovení čtyř běžných lipidů (tricaprylin, DPPG, cholesterol, DEPC) v liposomálních formulacích a dosáhnout detekčních mezí na úrovni mikrogramů na mililitr.

Použitá instrumentace

• LC systém Agilent 1260 Infinity II s binárním čerpadlem G7112B a automatickým vialsamplerem G7129A s vyhřívanou komorou
• Evaporativní detektor Agilent 1290 Infinity II ELSD (G4261B) s modrým laserem a fotonásobičem (PMT)
• Software pro zpracování dat Agilent OpenLab CDS verze 2.3.0
• Rozpouštědla: methanol LC/MS Chromasolv, vodný roztok amonného octanu a ultrapure voda z Milli-Q systému

Použitá metodika

Reverzní fázová chromatografie na kolonu Agilent ZORBAX Eclipse Plus C8 (4,6×250 mm, 5 µm) při teplotě 30 °C s gradientem metanol–voda obsahujících 315 mg amonného octanu. Mobilní fáze A (voda) začíná na 10 % a do 15. min lineárně klesá na 0 %, poté po 8 minutách vrací na výchozí poměr. Průtok činí 1,0 mL/min, injekční objem 10 µL (pro LOD 100 µL). ELSD je nastavena na teplotu odpařovače a nebulizéru 35 °C, průtok dusíku 1,6 SLM, PMT zesílení 1,0, sběr signálu 10 Hz se 3s vyhlazováním.

Hlavní výsledky a diskuse

Optimalizací teplot a průtoku plynu byla dosažena detekční mez (S/N >3) 1 µg/mL pro tricaprylin, DPPG a cholesterol, a 1,5 µg/mL pro DEPC. Kvadratická kalibrace poskytla výbornou linearitu (R2 >0,99). Opakovatelnost šesti po sobě jdoucích injekcí na 100 µg/mL vykázala %RSD retence <0,05 % a %RSD plochy <3 %.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje spolehlivé sledování lipidového složení liposomálních systémů v kvalitativní i kvantitativní kontrole farmaceutických formulací a přispívá ke zlepšení stability a účinnosti léčivých nosičů.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj ELSD detektorů se zaměří na vyšší citlivost, nižší úroveň šumu a možnost subambientních teplot pod 10 °C. Kombinace s hmotnostní spektrometrií a automatizované zpracování dat podpoří rozsáhlé lipidomické studie a wysokopropustné screenování ve farmaceutickém vývoji.

Závěr

Spojení Agilent 1260 Infinity II LC s 1290 Infinity II ELSD představuje robustní a vysoce citlivý analytický nástroj pro kvantifikaci lipidů v liposomálních formulacích. Metoda dosahuje detekčních mezí na úrovni mikrogramů na mililitr a vynikající opakovatelnosti, což je klíčové pro QA/QC farmaceutických produktů.

Reference

1. Agilent Technologies. Improved Sensitivity with the Agilent 1290 Infinity Evaporative Light Scattering Detector. Technical Overview 5991-2394EN.
2. Jeschek D.; et al. A Versatile, Quantitative Analytical Method for Pharmaceutical Relevant Lipids in Drug Delivery Systems. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2016, 119, 37–44.
3. Van Hoogevest P.; Wendel A. The Use of Natural and Synthetic Phospholipids as Pharmaceutical Excipients. European Journal of Lipid Science and Technology. 2014, 116(9), 1088–1107.