Rapid Confirmation of the Purity of APIs Using the Agilent LC/MSD iQ Mass Selective Detector and WalkUp Software

Význam tématu

Rychlé a spolehlivé stanovení čistoty léčivých látek (API) je klíčové pro kontrolu kvality ve farmaceutickém vývoji i výrobě. Tradiční HPLC metody založené výhradně na UV detekci mohou selhávat při identifikaci látek bez chromoforu nebo při koeluci složek. Přidáním hmotnostní detekce lze zkrátit dobu analýzy, zvýšit citlivost a jednoznačně rozlišit složky, což vede k efektivnějším rozhodnutím v syntetických a kontrolních procesech.

Cíle a přehled studie

Cílem aplikace bylo otestovat otevřený přístup k analýze čistoty 22 různých API pomocí systému Agilent InfinityLab LC/MSD iQ a softwaru MassHunter WalkUp. Hledalo se zjednodušení obsluhy bez hlubokých znalostí hmotové spektrometrie, zrychlení workflow a zajištění přesné detekce nežádoucích látek i při nízkých úrovních koncentrace.

Použitá instrumentace

• Agilent 1290 Infinity II (pumpa, vialsampler, multikolonový termostat, DAD detektor)
• Agilent InfinityLab LC/MSD iQ (jednokvadrupólový MSD, režim Auto Acquire)
• Softwarové platformy: Agilent OpenLab CDS (21 CFR Part 11), MassHunter WalkUp

Použitá metodika

API standardy (10 µg/ml) byly připraveny v acetonitrilu nebo methanolu a analyzovány ihned i po tříměsíčním skladování při pokojové teplotě. HPLC metoda s C18 kolonou (2,1 × 50 mm, 1,9 µm) využila gradientní eluce 5–90 % organické fáze (0,1 % FA) při průtoku 0,8 ml/min. DAD měřil při 254/210 nm. MSD v režimu ESI± skenoval m/z 100–1000 s automatickou optimalizací parametrů. WalkUp uživatel pouze zadá cílové hmotnosti a systém provede analýzu a zpracování samospotřebou.

Hlavní výsledky a diskuse

• Mass-detekce umožnila jednoznačné rozlišení koelujících látek i těch bez UV chromoforu.
• U erythromycinu, slabě absorbujícího při 210 nm, bylo možno z masového chromatogramu identifikovat primární API (m/z 733) i doprovodné impurity.
• Sledování stability captoprilu po třech měsících ukázalo vznik disulfidového dimeru (m/z 433), jehož detekce upozornila na pokles čistoty na 58 %.
• Integrovaný OpenLab CDS sample purity workflow automaticky vyhledal adukty [M+H]+, [M+Na]+, [M–H]–, [M+HCOO]– a vypočetl čistotu na základě TIC %.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda zkracuje čas na rozhodnutí v syntetických postupech, eliminuje nutnost externích laboratoří nebo přípravy rozsáhlých standardů a poskytuje přesnou a kvantitativní informaci o čistotě API. Otevřený přístup WalkUp minimalizuje školení obsluhy a urychluje workflow ve výzkumných i výrobních laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozšíření lze očekávat v automatizaci robustních QC procesů pro biotechnologické produkty, nasazení pokročilých algoritmů pro predikci degradace a integraci s LIMS. Kombinace vysoce citlivých detektorů s umělou inteligencí otevře cestu k online monitoringu fermentačních a syntetických reaktorů.

Závěr

Agilent InfinityLab LC/MSD iQ ve spojení se softwarem MassHunter WalkUp a OpenLab CDS nabízí uživatelsky přívětivý, rychlý a spolehlivý systém pro stanovení čistoty API. Přidání hmotové detekce k tradičním UV metodám významně zvyšuje schopnost odhalit a kvantifikovat nežádoucí látky, zrychluje proces rozhodování a šetří čas i náklady laboratoří.

Reference

1. Covert K., Ley R. Rapid Confirmation of the Purity of APIs Using the Agilent LC/MSD iQ Mass Selective Detector and WalkUp Software. Agilent Technologies, Inc. Application Note 2019.