High-sensitivity, high-throughput quantitation of catecholamine metabolites in urine by LC/MS/MS for clinical research

Význam tématu

Měření metabolitů katecholaminů ve moči poskytuje bezkontaktní a citlivé informace o biochemických procesech s využitím snadno dostupného vzorku. Sledování kyseliny vanilmandlové (VMA), homovanilové (HVA) a 5-hydroxyindolacetonové (5-HIAA) má klíčový význam v diagnostice neuroendokrinních nádorů, neurologickém výzkumu a farmakokinetice.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout rychlou, citlivou a robustní LC/MS/MS metodu pro simultánní kvantifikaci VMA, HVA a 5-HIAA v moči s vysokou propustností pro klinický výzkum.

Použitá metodika

Metoda založená na postupu dilute and shoot spočívá v odběru 20 µL moče, jejich smíchání se 980 µL methanolového ředidla obsahujícího deuterované vnitřní standardy a následné přímé injekci 1 µL do LC/MS/MS systému.

Použitá instrumentace

• Kolona Shim-pack GISS C18 (100×2,1 mm, 3 µm) při 40 °C
• Mobilní fáze A: 0,05 % kyseliny octové ve vodě; B: methanol; gradient 2–35 % B do 1,9 minuty, 100 % B 1,91–2,5 minuty
• Shimadzu LCMS-8060 v režimu Multiple Reaction Monitoring (MRM)

Hlavní výsledky a diskuse

• Lineární kvantifikační rozsah 0,1–77,5 mg/L s koeficienty determinace R² nad 0,999
• Senzitivita umožňuje detekovat koncentrace v ng/mL v reálných vzorcích
• Přesnost a precizita při pre-validaci: inter-denní RSD <3,3 % a přesnost 87–103 %
• Výborná korelace s konvenční HPLC: R² >0,95, stáří závislosti blízké jedné

Přínosy a praktické využití metody

Analytický cyklus o délce tří minut a jednoduchá příprava vzorku umožňují zefektivnit vyšetření neurotransmiterů v rutinních laboratořích a vysokopropustných výzkumných centrech.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšíření panelu metabolitů, plná robotizace přípravy vzorků a adaptace metody pro terminály point-of-care představují perspektivní směry dalšího rozvoje.

Závěr

Navržená LC/MS/MS metoda kombinuje vysokou propustnost, citlivost a reprodukovatelnost při stanovení VMA, HVA a 5-HIAA v moči a je vhodná pro klinické studie a rutinní analýzy.